Tesis doctoral de Marta Blanch Lozano
La proteína gaga de drosophila melanogaster, codificada por el gen trithoralx like (trl), es una proteína ubicua con gran variedad de funciones. Gaga es capaz de activar un elevado número de genes y se ha visto que puede reprimir al gen que la codifica. Todavía no se conocen los mecanismos por los cuales gaga es capaz de activar y para intentar indagar sobre el posible mecanismo de activación de gaga hemos intentado ver la relación de ésta con la maquinaria general de transcripción. Inmunolocalizaciones en cromosomas politénicos muestran una elevada colocalización de gaga con la rna polimerasa ii y con diferentes tafs del complejo tfiid. Mediante coinmunoprecipitaciones realizadas sobreexpresando gaga y taf3-ha o taf4-ha, hemos corroborado la interacción in vivo de gaga con estos dos componentes de tfiid. Ensayos de pull down y coinmunoprecipitación sugieren que ni el dominio poz ni el dominio q son imprescindibles para la interacción con estos dos tafs y apuntan a una interacción por los dominios x y dbd. Ensayos de transfección transitoria, sobreexpresando en células s2 cantidades constantes de gaga y cantidades crecientes de taf3-ha y taf4-ha, no han permitido ver ningún efecto coactivador de estos tafs sobre gaga en el contexto de distintos promotores. está descrito que el motivo lxxll es un posible motivo de unión de factores de transcripción a taf4 en insectos. En este trabajo se han identificado dos de estos motivos en el dominio poz de gaga. Mediante transfección transitoria se ha visto que mutaciones de residuos no esenciales en el motivo lxxll no afectan la capacidad activadora ni represora de la proteína y en transfección los niveles de proteína de estos mutantes son similares a los de la proteína salvaje. Contrariamente, cualquier mutación en una leucina esencial del motivo lxxll, concretamente la leucina 87 (l87), genera una proteína gaga defectiva en activación pero totalmente funcional en represión. Estos mutantes al sobreexpresarse, presentan unos niveles menores que gaga salvaje sobreexpresada. Paralelamente, en un sistema heterólogo (células hela) se ha visto que aunque el mutante l87d sí que presenta niveles de proteína similares a los de la proteína salvaje, tampoco es capaz de activar correctamente. Así, se puede afirmar que el residuo l87 es un residuo importante para la capacidad activadora de gaga. Sin embargo, no se puede descartar que la falta de activación venga dada por una desestabilización del dominio poz o bien por algún problema con la interacción con taf4. se ha observado que la sobreexpresión de gaga en embriones y discos imaginales de larvas en tercer estadio no alteran los patrones de expresión de ultrabithorax, engrailed y even skipped. Tampoco la depleción de gaga en disco imaginal de ala afecta a la expresión de engrailed y ultrabithorax. El hecho de que ni la sobreexpresión ni la depleción de gaga en disco imaginal altere ninguno de estos genes, que se sabe que gaga controla a nivel embrionario, indica que gaga no debe ser importante para la regulación de estos genes a nivel larvario. ensayos de microarrays de sobreexpresión y falta de función de gaga en disco imaginal de larva en tercer estadio, sugieren la implicación de gaga en procesos que, pendientes de confirmación experimental posterior, ampliarían todavía más el abanico de las múltiples funciones ya conocidas de gaga. Adicionalmente, estos ensayos confirman que gaga actúa como factor activador de la transcripción de múltiples genes en drosophila.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterització funcional del factor gaga de drosphila melanogaster«
- Título de la tesis: Caracterització funcional del factor gaga de drosphila melanogaster
- Autor: Marta Blanch Lozano
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 21/12/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Jordi Bernués Martínez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: oriol Cabré fabré
- veronica Noe mata (vocal)
- (vocal)
- (vocal)