Tesis doctoral de Regina Niñoles Rodenes
En la presente tesis doctoral, se han empleado dos aproximaciones complementarias para abordar las bases moleculares de la homeostasis de ph en a. Thaliana. Por un lado, se ha realizado un rastreo genético empleando ácido acético, en busca de mutantes tolerantes a la acidificación intracelular, y por otro, se ha estudiado la respuesta transcripcional al estrés por ácido acético en arabidopsis thaliana. el rastreo genético de una colección de mutantes activation tagging, ha permitido aislar el mutante wat1-1d (weak acid tolerant1-alelo1, dominante), por ser más tolerante a la germinación y apertura de cotiledones en presencia de ácido acético. Wat1-1d, es un mutante dominante negativo, cuya mutación se localiza en el locus at3g55480, que codifica para la adaptina ?3 de a. Thaliana. Esta proteína está implicada en el transporte de proteínas al tonoplasto, y su pérdida de función puede provocar defectos en la localización de transportadores vacuolares. En ensayos de aparición de cotiledones, el mutante wat1-1d es más tolerante a ácidos débiles, aba y estrés osmótico (nacl, manitol), pero es más sensible a cationes tóxicos (li+ y norespermidina). En estadios posteriores, el mutante es capaz de mantener un ph más alcalino durante un tratamiento de perfusión con ácido acético. El análisis de los distintos mecanismos de regulación de la homeostasis de ph, ha indicado que el mutante expulsa una mayor cantidad de protones al medio, en condiciones de estrés por ácido acético, cosa que no ocurre en condiciones normales. La salida de h+ no causa una hiperpolarización de la membrana del mutante, debido a que la toma de rb+ (análogo del k+), se ve incrementada en estas condiciones. La mayor sensibilidad a licl y la tolerancia a nacl observada en la apertura de los cotiledones, se mantiene en plantas adultas regadas con estos cationes tóxicos. El mutante wat1-1d, no muestra diferencias en la toma de na+, li+ o rb+ (k+) a tiempos cortos. Sin embargo, acumula más k+, en raíz y parte aérea, y menos na+ y li+, en la raíz, tras 2 días de tratamiento. a partir de estos resultados se propone un modelo por el cual, la mutación en la adaptina beta 3, provocaría que un transportador de salida de potasio vacuolar se deslocalizara parcialmente a membrana plasmática. La falta del transportador en vacuola, dificultaría la salida de potasio, provocando una hiperpolarización del tonoplasto que reduciría la entrada de li+. La menor toma de litio por la vacuola haría que su acumulación global fuera menor, pero se localizaría en el citoplasma, donde resulta más tóxico. Por otra parte, la hiperpolarización disminuiría la entrada de protones por la h+atpasa vacuolar, lo que afectaría de forma indirecta a los antiportadores nhx, disminuyendo también la entrada de sodio en vacuola. Por último, en condiciones de estrés por ácido acético, el transportador de k+ (ahora localizado en la membrana plasmática), se activaría, incrementando, de este modo, la toma de potasio. Esta entrada de potasio despolarizaría la membrana plasmática, favoreciendo la salida de protones que se observa en el mutante en estas condiciones. el análisis transcripcional realizado en el presente trabajo, muestra que un tratamiento con ácido acético induce diversos genes implicados en respuestas a estreses abióticos, como calor, luz intensa y estrés oxidativo. La comparación de los genes inducidos por estos estreses, con los inducidos por ácido acético, indica que el estrés más semejante es el estrés por calor. De hecho, entre los genes con mayor nivel de inducción se encuentran varios hsf (heat shock factors y hsp (heat shock proteins). Este resultado sugiere que el estrés por ácido acético causa desnaturalización de proteínas. Por otro lado, muchos simportadores de toma de nutrientes (p, s) se inducen por el tratamiento con ácido acético, lo que probablemente refleja que la acidificación intracelular dificulta la entrada de nutrientes mediante simporte con protones.
Datos académicos de la tesis doctoral «Biología molecular de la regulación de la homeostasis de ph en arabidopsis thaliana«
- Título de la tesis: Biología molecular de la regulación de la homeostasis de ph en arabidopsis thaliana
- Autor: Regina Niñoles Rodenes
- Universidad: Politécnica de Valencia
- Fecha de lectura de la tesis: 14/07/2011
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ramón Serrano Salom
- Tribunal
- Presidente del tribunal: alonso Rodriguez navarro
- roque Ros palau (vocal)
- José Miguel Mulet salort (vocal)
- Fernando Aniento company (vocal)