Tesis doctoral de Fernando Arias De La Vega
El polimorfismo de nucleótido simple (snp) consiste en una sustitución de un nucleótido simple por otro en la secuencia del adn, dando lugar a 2 alelos diferentes. el objetivo del presente proyecto se dirige a la evaluación de polimorfismos en relación con la respuesta al tratamiento en pacientes con carcinoma gástrico. los polimorfismos estudiados fueron los siguientes: polimorfismo en el gen xpd lys751gln, polimorfismo arg399gln en el exón 10 del gen xrcc1, polimorfismo ile105val del gen gstp1, snp localizado en la región promotora (c-69t) del gen gsta1, snp arg264cys en el citocromo p450-19, citocromo p450-1b1, polimorfismos de repetición (ta)ntaa en el promotor del gen de la ugt1a1 y polimorfismo vntr del promotor del gen de la timidilato sintetasa (tser). objetivos del proyecto: correlacionar los polimorfismos de nucleótido simple mencionados, con la respuesta clínica en pacientes diagnosticadas de carcinoma gástrico y tratados con radio-quimioterapia. metodología: se han incluido en el estudio 44 pacientes diagnosticados y tratados de cáncer gástrico en el hospital de navarra desde octubre 1992 a enero 1999. El 32% de los pacientes presentaban estadio i-ii y 68% estadios iii-iv. Gastrectomía r0 80%, r1 18% y r2 2%. El tratamiento administrado, previa gastrectomia, ha sido de quimioterapia con 5-fluorouracil (5-fu) y leucovorin (lv) y radiación local post operatoria según el esquema de macdonald. El tiempo medio de seguimiento fue de 46.9 meses. extracción de adn genómico: tras el procesamiento adecuado de las muestras de tumor en parafina, entre 7-509 ng/ul han sido extraídos y alrededor de 45-200ng de adn genómico ha sido utilizado como molde para la amplificación por pcr. análisis de los polimorfismos: las secuencias de los polimorfismos génicos a evaluar se obtuvieron a partir de genbank (national center for biotecnology information, ncbi). el análisis de los polimorfismos en los genes xpd, xrcc1, gstp1, gsta1, cyp19a1, cyp1b1 han sido realizados con la técnica de pcr/rflp. Los productos de pcr se analizan en un gel de agarosa al 2% disuelta en buffer 1xtae y teñido con bromuro de etidio para su posterior visualización en un transiluminador de luz ultravioleta. El gel se corre a 160 voltios durante 20 min. Una vez comprobada la presencia de las bandas se procede a digestión. el producto de cada pcr se digiere con su correspondiente enzima de restricción y las condiciones propuestas por la casa comercial new england biolabs (izasa sa, barcelona, españa). se ha requerido el diseño de los primers (cebadores) únicamente para el gen cyp1b1 y lo hemos realizado utilizando el software oligo for macintosh y el primerexpress v2.0 de pe-biosystems. Los primers de los demás genes han sido recogidos de las publicaciones y reproducidas con ligeras modificaciones. análisis estadístico: las curvas de supervivencia libre de progresión se analizan según el método de kaplan-meier. La comparación entre las curvas de supervivencia de las distintas categorías de las variables discretas se realizan utilizando los tests de log-rank y el estadístico de breslow. Con aquellas variables con significación estadística en el análisis univariado de supervivencia, se realizan un estudio multivariado con un modelo de regresión logística con objeto de identificar aquellos con valor pronóstico independiente. el estudio estadístico se realizó con la ayuda del paquete estadístico spss software 11.0 version for windows (spss, inc. Chicago). Valores de p≤0.05 se consideraron estadísticamente significativos. resultados: el perfil y frecuencia genotípica de cada uno de los genes analizados por pcr-rflp, pcr-gel especial y pcr-secuenciación están detallados en los anexos i y ii. tras el análisis estadístico se ha determinado que el polimorfismo del gen xpd favorece al tratamiento administrado. Esta relación ha sido estadísticamente significativa y ha sido publicada recientemente en la revista world journal of gastroenterology (wjg).
Datos académicos de la tesis doctoral «Correlación de los polimorfismos de nucleótido simple con la respuesta en el carcinoma gástrico«
- Título de la tesis: Correlación de los polimorfismos de nucleótido simple con la respuesta en el carcinoma gástrico
- Autor: Fernando Arias De La Vega
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 19/09/2012
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Jesús Garcia Foncillas Lopez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: felipe angel Calvo manuel
- jordi Giralt lópez de sagredo (vocal)
- alejandro De la torre tomás (vocal)
- Francisco Javier Alvarez-cienfuegos suarez (vocal)