Tesis doctoral de Paula Garcia Huerta
Regulación transcripcional del receptor p2x7 en células neurales.Los receptores purinérgicos p2x7 están implicados tanto en procesos fisiológicos como patológicos dentro del sistema nervioso central. Su activación inicia diversas cascadas de señalización en función del tipo celular incluyendo neuroprotección y control del crecimiento y ramificación axonal. Actualmente, aunque existen multitud de hallazgos que demuestran que la expresión de p2x7 está alterada en diversas enfermedades neurodegenerativas como huntington así como en cáncer, se conoce muy poco sobre la regulación transcripcional del gen p2rx7. En esta tesis se describe por primera vez la implicación del factor de transcripción sp1 en la regulación de la expresión del receptor p2x7. Se ha delimitado una región mínima en el promotor del gen p2rx7 de ratón que contiene cuatro sitios sp1, dos de ellos conservados en mamíferos. La funcionalidad de estos sitios se confirmó por mutagénesis dirigida y sobreexpresión e interferencia de sp1 en células de neuroblastoma de ratón n2a. Además, el tratamiento farmacológico con mitramicina a, un antibiótico capaz de inhibir selectivamente la unión de sp1 a sus sitios de unión en el adn, redujo los niveles de expresión en cultivos primarios de neuronas y astrocitos de corteza de ratón. El uso del ratón transgénico p2xr7-egfp que expresa la proteína verde fluorescente bajo el promotor de p2xr7 nos permitió observar una elevada correlación entre células que expresaban sp1 y gfp en el cerebro, demostrando que sp1 es un elemento clave en la regulación transcripcional del receptor p2x7 en el sistema nervioso. Una vez identificado sp1 como el principal factor de transcripción implicado en la regulación de la expresión basal del gen p2rx7, quisimos determinar qué cascadas de señalización intracelular podían regular la expresión del receptor p2x7 a nivel transcripcional y si lo hacían modulando la actividad del factor sp1 o mediante otros mecanismos. Trabajos previos indicaban que la ausencia de suero facilitaba el acceso del factor de transcripción a sus sitios sp1 en el adn. En ausencia de suero, las células de neuroblastoma n2a aumentaba la expresión del receptor p2x7. Sin embargo, otros estudios indican que la ausencia de suero puede activar el receptor del factor de crecimiento epidérmico (egf) al alterarse la estructura de la bicapa lipídica. El tratamiento farmacológico con un inhibidor del egfr nos permitió identificar su implicación en la regulación de la transcripción del receptor p2x7. Además, la activación del egfr inicia una cascada de señalización a través de pi3k y akt capaz de potenciar la actividad de sp1, facilitando su entrada a núcleo y favoreciendo la transcripción de p2rx7. Por otra parte, la retirada de suero provoca la activación de pkc¿, una pkc atípica que parece estar regulando negativamente la expresión de p2x7. A modo de resumen, y basándonos en los resultados obtenidos en esta tesis doctoral, podemos concluir que en condiciones óptimas de cultivo, donde el medio extracelular es rico en factores tróficos y componentes lipoproteicos que mantienen la estabilidad de la membrana, existe una expresión basal de p2x7 dependiente de sp1 que mantiene a las células de neuroblastoma en un estado proliferativo. Cuando se retira el suero del medio de cultivo, se produce una activación del egfr independiente de ligando y se activa la vía de pi3k/akt que en última instancia es la responsable de fosforilar y activar sp1. Paralelamente, la privación de suero induce la activación de pkc¿ (ya sea de forma dependiente de pi3k/pdk-1 o dependiente de ceramidas), que regula negativamente la expresión del receptor p2x7 (ya sea fosforilando sp1 o secuestrando akt). El resultado neto de la privación de suero es un aumento en la expresión del receptor p2x7 dependiente de sp1.
Datos académicos de la tesis doctoral «Regulación transcripcional del receptor p2x7 en células neurales«
- Título de la tesis: Regulación transcripcional del receptor p2x7 en células neurales
- Autor: Paula Garcia Huerta
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 10/07/2013
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Rosa Gomez Villafuertes
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Rodríguez artalejo
- mairena Martin lopez (vocal)
- carmen Aragón rueda (vocal)
- José Manuel Cuezva marcos (vocal)