Tesis doctoral de Carme Arnan Ros
La nucleoplasmina (np) es la proteína mayoritaria del núcleo de los oocitos y huevos de la rana xenopus laevis y otros anfibios. Presenta tres tramos acídicos denominados a1, a2 y a3. Esta proteína participa en la remodelación de la cromatina durante la fecundación, mediatizando la descondensación de la cromatina espermática y facilitando el ensamblaje de nucleosomas. en este trabajo se ha continuado el estudio de distintas formas recombinantes de la np (r-np, r-np142 y r-np121). Interesaba determinar la influencia de distintas condiciones en la estabilidad y la pentamerización de la molécula. en esta misma línea se estudió el papel de las cys en la pentamerización. mediante mutagénesis dirigida se substituyeron las cys por ser y se observó que la mutación c45s favorecía la monomerización de la forma r-np142, pero no afectaba en la oligomerización de r-np ni r-np121. estos resultados indican que no hay puentes disulfuro en la estructura pentamérica de la np. Los estudios para determinar la estructura secundaria mediante dicroísmo circular pusieron de manifiesto que el mutante r-np142 c45s tenía una estructura plegada al azar y no se mostraba funcional en la descondensación de la cromatina espermática de dicentrarchus labrax. otras técnicas utilizadas fueron al microscopía electrónica y las técnicas cristalográficas. otro objetivo de este trabajo fue la caracterización de las interacciones de la np con las histonas del núcleo del nucleosoma. Mediante ultracentrifugación analítica y gradientes de sacarosa se pudo determinar que la np podía unir los cuatro tipos de histonas nucleosómicas con una estequiometría correspondiente a 1 mol de pentámero de nucleoplasmida por mol de octámero de histonas nucleosómicas. La np también es capaz de unir histonas tripsinizadas (sin las colas básicas) manteniendo la misma estequiometría. También la forma r-np121 (sin el tramo acídico principal a2) es capaz
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudis bioquímics i estructurals de diferents formes de nucleoplasmina. interacció amb histones i altres proteÁ¯nes bÁ siques«
- Título de la tesis: Estudis bioquímics i estructurals de diferents formes de nucleoplasmina. interacció amb histones i altres proteÁ¯nes bÁ siques
- Autor: Carme Arnan Ros
- Universidad: Politécnica de catalunya
- Fecha de lectura de la tesis: 05/06/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Antonio Subirana Torrent
- Tribunal
- Presidente del tribunal: joan Ausió casas
- adelina Prado ruiz (vocal)
- jordi Bernués martínez (vocal)
- manel Chiva rogo (vocal)