Tesis doctoral de Anna Rosanas Hernando
El objetivo de este trabajo ha sido el aislamiento, secuenciacion y caracterizacion del gen gyra que codifica la subunidad a de la dna girasa de e. Carotovora, p. aeruginosa y r. Sphaeroides. Con este proposito se ha analizado el grado de conservacion de estos genes y sus secuencias polipeptidicas deducidas y se ha estudiado la regulacion de su expresion genica. el aislamiento del gen gyra de e. Carotovora y p.Aeruginosa se realizo por complementacion heterologa de la mutacion termosensible gy-ra43 (ts) de escherichia coli, por conjugacion de las correspondientes genotecas construidas. Respecto r. Sphaeroides, se utilizo un fragmento interno del gen gyra, amplificado por pcr, como sonda para aislar el gen gyra de este microorganismo mediante hibridacion de las genotecas construidas. el analisis de las secuencias de los genes aislados ha puesto de manifiesto un elevado grado de homología entre ellos, tanto a nivel de secuencia de dna como de proteina, siendo la region n-terminal mucho mas conservada que la c-terminal, especialmente los residuos entorno la tirosona responsable de la actividad catalitica del enzima. mediante la construccion de fusiones cromosomicas entre el promotor de los genes gyra de e. Carotovora, p. aeruginosa y r. Sphaeroides con el gen lacz de e. Coli se ha estudiado la regulacion transcripcional de los genes aislados. Las fusiones de e. Carotovora y p. Aeruginosa son inducibles por los inhibidores de girasa novobiocina y acido nalidixico, a diferencia de lo que ocurre con r. sphaeroides que no ha presentado induccion con ninguno de los agentes probados. por otro lado con los mismos «primers» de pcr se ha conseguido amplificar fragmentos del gen gyra de diferentes bacterias gramnegativas, pudiendo tener una aplicacion clinica y filogenetica. finalmente, se determino la localizacion del gen gyra de r.Sphaeroides en el cromosoma mediante la tecnica de electroforesis de campo pulsado, quedando fi
Datos académicos de la tesis doctoral «Aislamiento y caracterizacion del gen gyra de erwinia carotovora, pseudomonas aeruginosa y rhodobacter sphaeroides.«
- Título de la tesis: Aislamiento y caracterizacion del gen gyra de erwinia carotovora, pseudomonas aeruginosa y rhodobacter sphaeroides.
- Autor: Anna Rosanas Hernando
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1997
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Isidre Gibert González
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jordi Vila Estepe
- Xavier Garriga Font (vocal)
- Miguel Regué Queralt (vocal)
- Torre Mañas M. Elvira (vocal)