Tesis doctoral de Israel Salguero Corbacho
Resumen: en escherichia coli, la reducción de los ribonucleótidos utilizados en la síntesis de dna a sus desoxiribonucleótidos (dntps) correspondientes se lleva a cabo por la ribonucleótido difosfato reductasa (ndpreductasa) que es esencial para la replicación del cromosoma. La mutación nrda101 da lugar a una ndp reductasa termosensible. La incubación a 42ºc de extractos crudos o preparaciones puras de la enzima mutante destruye su actividad en dos minutos; sin embargo, al incubar a 42ºc una bacteria mutante termosensible nrda101, no se detiene la replicación hasta transcurridos 40-50 minutos después del cambio de temperatura. Además, sorprendentemente, si el cambio de temperatura se lleva a cabo en presencia de rifampicina, la replicación continúa durante 150 minutos hasta producir cromosomas completos. Esto sugiere que la ndp reductasa mutada podría estar protegida de la inactivación térmica por alguna hiperestructura, ya que el fenotipo de esta estirpe no es el característico de un mutante de elongación. en este trabajo se ha analizado la implicación de las enzimas de recombinación en la replicación de este mutante a temperatura restrictiva en presencia de rifampicina, observándose que en estas condiciones la replicación cromosómica es totalmente dependiente de reca y, en concreto, de su actividad estabilizadora de las horquillas de replicación paradas. Esto indica que la mutación nrda101 induce cambios en las horquillas de replicación que las hacen mas susceptibles a ser degradadas en ausencia de la protección de reca. por otra parte, en este estudio se han encontrado y caracterizado dos condiciones que posibilitan un aumento de la termorresistencia de la replicación en una estirpe nrda101: la inhibición de la síntesis de proteínas y la sobrexpresión de los genes nrdab. Se determinó que la proteína codificada por nrda101 es degradada a 42ºc de manera dependiente de la síntesis de proteínas y se observó que esta degradación es compensada por la sobrexpresión de nrdab. Estos resultados indican que la ndp reductasa es degradada a 42ºc en un mutante nrda101 por una proteasa sintetizada tras el cambio de temperatura y que la condición que permite un aumento de la replicación a temperatura restrictiva es el mantenimiento de los niveles de ndp reductasa. El hecho de que esta enzima permanezca activa a 42ºc durante mucho más tiempo del que se creía, aún siendo termolábil, y que su inactivación esté causada principalmente por su degradación, implica que debe estar protegida de su alteración térmica por alguna estructura. en este trabajo por tanto, se aportan pruebas que apoyan la hipótesis de que la ndp reductasa estaría incluida en la hiperestructura de replicación, lo que evitaría su inactivación a 42ºc en el caso del mutante nrda101, reflejando una conexión física entre el complejo de biosíntesis de nucleótidos y el de replicación.
Datos académicos de la tesis doctoral «Replicación cromosómica en presencia de una nucleósido-difosfato reductasa codificada por el alelo nrda101 de escherichia coli«
- Título de la tesis: Replicación cromosómica en presencia de una nucleósido-difosfato reductasa codificada por el alelo nrda101 de escherichia coli
- Autor: Israel Salguero Corbacho
- Universidad: Extremadura
- Fecha de lectura de la tesis: 14/12/2007
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Elena Guzmán Cabañas
- Tribunal
- Presidente del tribunal: José emilio Rebollo feria
- Jaime tomás Correa bordes (vocal)
- enrique Viguera mínguez (vocal)
- Fernando Henao dávila (vocal)