Tesis doctoral de Monica Martinez Martinez
La infección con el virus del papiloma humano (vph) es la enfermedad de transmisión sexual más común entre las mujeres, estimándose que el volumen de mujeres infectadas por vph es de alrededor de 300 millones. Aproximadamente un tercio de los vph de l epitelio mucoso se denominan de alto riesgo, y están relacionados con el cáncer de cuello uterino. la tesis aborda la producción de antígenos del virus del papiloma humano (vph), con utilidad clínica para el estudio de la respuesta inmune frente a la infección natural, dada la complejidad descrita en dicha respuesta y que podría estar relacionada con la progresión de la enfermedad. Además, la introducción de las vacunas frente a la infección con vph, plantea nuevos retos para los estudios ser ológicos, relacionados con el establecimiento de nuevas pruebas específicas y sensibles para valorar la respuesta inmune humoral en la población vacunada, más aún cuando en la actualidad se desconocen en profundidad las características y perdurabili dad de la protección conferida por la vacunación. el objetivo del trabajo ha sido la producción de la proteína mayoritaria de la cápsida (l1) de vph18, responsable junto con el tipo 16 del 70 de los cánceres de cérvix. La expresión heteróloga se ha realizado tanto como proteína recombinante en un sistema procariota (escherichia coli), como en un sistema de expresión eucariota basado en una levadura metilotrófica (pichia pastoris). Además se ha estudiado la cinética de expresión de la proteína l 1 de vph18 en células de insecto empleando baculovirus recombinantes, con objeto de determinar los parámetros óptimos para la posterior obtención y purificación de vlps. en el sistema bacteriano se ha realizado la expresión de dos proteínas recombina ntes, como proteínas de fusión con gst, una proteína completa delecionada en 71 aminoácidos correspondientes a una región altamente hidrofóbica (gst-?N7118l1) y otra conteniendo sólo el extremo carboxi-terminal de la proteína l1 (gst-18l1ct ). En amb os casos las proteínas se acumularon en la fracción insoluble en forma de cuerpos de inclusión. El tratamiento con agentes reductores y lisozima durante la lisis, así como con agentes reductores para la solubilización de la fracción insoluble, permit ió incrementar la recuperación de ambas. La purificación mediante cromatografía de afinidad con glutation en combinación con elución en pbs/urea, permitió eliminar proteínas de la bacteria que coprecipitaban con la proteína de fusión. La proteína gst
Datos académicos de la tesis doctoral «Expresión heteróloga de la proteína mayor de la cápsida (l1) del virus del papiloma humano tipo 18. purificación y caracterización de las proteínas recombinantes y partículas similares al virus (vlps)«
- Título de la tesis: Expresión heteróloga de la proteína mayor de la cápsida (l1) del virus del papiloma humano tipo 18. purificación y caracterización de las proteínas recombinantes y partículas similares al virus (vlps)
- Autor: Monica Martinez Martinez
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 03/10/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Marta Ortiz Rivera
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan Carlos Gutiérrez fernández
- María isabel Jiménez alonso (vocal)
- José Manuel Echevarría mayo (vocal)
- félix Gil dones (vocal)