Tesis doctoral de Adoracion Rodríguez Arnedo
La proteína isocitrato deshidrogenasa es una enzima clave del ciclo de los ácidos tricarboxílicos. Cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato en a-cetoglutarato en presencia de nad(p)+ y liberando co2 en el proceso. En el organismo halófilo haloferax volcanii, esta enzima es dimérica, dependiente de nadp+ y de la presencia de mg2+ como catión divalente, siendo estable en un amplio rango de concentraciones salinas. En la actualidad existen muchas isocitrato deshidrogenasas secuenciadas pero muy pocas estructuras tridimensionales de esta enzima resueltas; en concreto sólo dos, las de los organismos escherichia coli y bacillus subtilis, pero ninguno de ellos presenta comportamiento extremófilo. A pesar de ello, las isocitrato deshidrogenasas diméricas presentan un elevado grado de identidad de secuencia, lo que permite trabajar con estas dos enzimas como modelos. En particular, en la enzima de e. Coli, se han realizado estudios de regulación por fosforilación, de mutagénesis para producir el cambio en la especificidad del coenzima a nad y para identificar los aminoácidos implicados en la unión del sustrato, así como ensayos cristalográficos con la consecuente resolución de la estructura tridimensional. En este trabajo, se han realizado estudios filogenéticos, bioquímicos y físico-químicos como fluorescencia, dicroísmo circular y ultracentrifugación diferencial, así como ensayos de mutagénesis dirigida para producir el cambio de especificidad de la enzima por el coenzima a nad; además, se ha realizado el modelado teórico de la enzima, tanto en su forma nativa como mutante. Para realizar la gran mayoría de estos estudios es necesario obtener gran cantidad de isocitrato deshidrogenasa que, por cultivo del organismo de procedencia, hfx. Volcanii, sería muy complicado de conseguir y requeriría mucho tiempo y esfuerzo. Para ello se ha clonado y expresado la enzima de forma heteróloga en e. Coli, s
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudios moleculares, físico-químicos e ingeniería proteica de isocitrato deshidrogenasa de haloferax volcanii«
- Título de la tesis: Estudios moleculares, físico-químicos e ingeniería proteica de isocitrato deshidrogenasa de haloferax volcanii
- Autor: Adoracion Rodríguez Arnedo
- Universidad: Alicante
- Fecha de lectura de la tesis: 03/12/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María José Bonete Pérez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Llorca alcaraz Francisco i.
- Francisco Juan Martinez mojica (vocal)
- durán Encarnación mellado (vocal)
- (vocal)