Tesis doctoral de Monica Amblar Esteban
El trabajo de esta tesis doctoral se ha centrado en la caracterización de la actividad 5¿de la dna polimerasa i de streptococcus pneumoniae. Mediante el análisis mutacional del dominio de actividad nucleasa y la determinación de las actividades enzimáticas de los derivados mutacionales, se ha establecido que mutaciones introducidas en los residuos d10,d190 y e114 afectan sólo las actividades relacionadas con el dominio nucleasa. Los estudios realizados han generado resultados, que indican la función de dichos residuos y apoyan un modelo catalitico que requiere la unión de dos metales (me1 y me2). el residuo d190 parece estar implicado en el evento catalítico interaccionado con el metal me2 requerido para la actividad nucleásica. El residuo e114 estaría implicado en la unión al dna sustrato y proximo al sitio del me1. el residuo d10 estaría localizado en las proximidades del sitio me1, sin interaccionar directamente con el metal, y siendo requerido para la actividad catalítica. El derivado mutacional d10a, carente de actividad nucleásica, ha sido analizado para su utilización en tecnicas de secuenciación de dna manual y automática. Se ha comprobado que dicha proteína es capaz de elongar oligonucleótidos marcados fluorescentemente que emiten luz en el reango de infrarojo y de incorporar nucleótidos marcados con digoxigenina(marcaje interno) dando un patrón de bandas homogeneo, características que no presentan otras polimerasas, como las del bacteriófago t7 y la de thermus aquaticus, utilizadas rutinariamente en técnicas de secuenciación.
Datos académicos de la tesis doctoral «Analisis mutacional del dominio de actividad nucleasica 5¿-3¿de la dna polimerasa i de streptococcus pneumoniae.«
- Título de la tesis: Analisis mutacional del dominio de actividad nucleasica 5¿-3¿de la dna polimerasa i de streptococcus pneumoniae.
- Autor: Monica Amblar Esteban
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 16/05/2000
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Paloma López García
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Tormo garrido
- ramon Diaz orejas (vocal)
- Luis Blanco dávila (vocal)
- Martin sanchez María Jesús (vocal)