Tesis doctoral de Monica Gutierrez Rivas
En este trabajo se caracterizan una serie de variantes de la retrotranscriptasa (rt) del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1(vih-1) portadoras de cambios de aminoácido que influyen en la interacción de la enzima con los desoxirribonucleotidos, y que debido a este efecto pueden alterar las fidelidad de copia o especificidad de nucleotido de la rt. en la primera parte de la tesis se describe la caracterización de mutantes que afectan a la posición phe-160. Este residuo se encuentra interaccionando con la tyr-115, cuyo papel en el reconocimiento de nucleotido se demostró en nuestro laboratorio. Cambios no conservativos de phe-160 por ala, gln o ile producen una pedida importante en la actividad dna polimerasa de la enzima, al perderse la interacción hidrofóbica entre las cadenas laterales de los aminoácidos de las posiciones 115 y 160. Los cambios de phe por trp mantienen la actividad dna polimerasa de la rt, y los ensayos bioquimicos encaminados a determinar la fidelidad de copia de estas dos variantes de la rt mostraron pequeñas diferencias entre ellas y la enzima natural. De los estudios se puede incluir que si bien deteminante en la especificidad de nucleótido o fidelidad de copia siempre que se mantenge el aracter aromatico de su cadena lateral. además se ha demostrado que la tyr-115 juega un papel crucial para la discriminacion entre ribonucleotidos (rntps) y desoxirribonucleotidos (dntps), siendo incorporados los rntps con mayor eficacia por mutantes como la y115v o y115g, en los que la cadena lateral voluminosa de la tyr-115 ha sido sustituida por cadenas laterales relativamente pequeñas. finalmente, se ha estudiado el papel del cambio de met-230 por ile, que apareció como cambio compensador en experimentos in vitro llevados a cabo con virus portadores de la mutacion y115w en la rt, que presentaban una baja tasa de replicación debida a la baja actividad polimerasa y fidelidad de copia conferida por el cambi
Datos académicos de la tesis doctoral «Contribucion de la phe-160 y la met-230 a la fidelidad de copia de la retrotranscriptasa del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1.«
- Título de la tesis: Contribucion de la phe-160 y la met-230 a la fidelidad de copia de la retrotranscriptasa del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1.
- Autor: Monica Gutierrez Rivas
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 17/11/2000
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Esteban Domingo Solans
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ignacio Fita rodriguez
- Luis Blanco dávila (vocal)
- cecilio López galíndez (vocal)
- José Alcami pertejo (vocal)