Tesis doctoral de Beatriz Montaner Ramoneda
En este trabajo se estudió el efecto del sobrenadante (cs-2170), obtenido del cultivo de serratia marcescens 2170, en la viabilidad de diferentes líneas celulares cancerosas de origen hematopoyético (jurkat, nso, hl-60, molt-4 y ramos), gastrointestinal (dld-1, sw-620 y hgt-1), mama (mcf-7) y epitelial (a431), así como en líneas celulares no cancerosas (nih-3t3, swiss-3t3, nrk y mdck). A través del ensayo del mtt se observó un descenso rápido (4h) en el número de células viables. Este efecto citotóxico se producía a través de la apoptosis, según pudimos determinar por la fragmentación del dna en escalera, la tinción nuclear con hoechst 33342 y por análisis por facs de la externalización de los residuos fosfatidilserina de la membrana celular. Nosotros hemos purificado la molécula responsable de este efecto apoptótico y determinado su estructura química. Para ello utilizamos distintos mutantes de s.Marcescens (of, wf y 933), que lo eran en la vía de síntesis de la prodigiosina (pg), y de esta forma vinos que la pg estaba implicada en la inducción de apoptosis. Esta evidencia fue corroborada por el análisis espectroscópico de la pg aislada de s.Marcescens. estos resultados indican que pg, un inmunosupresor, induce apoptosis en células cancerosas, pero no tiene un efecto tóxico en células no cancerosas, existiendo la posibilidad de su utilidad terapéutica como agente antineoplásico. el mecanismo de pg también fue estudiado. Pg induce apoptosis de forma independiente a p53 y bcl-2. Este efecto fue bloqueado utilizando el inhibidor de caspasas z-vad.Fmk, indicando que están implciadas las caspasas. También vimos por western blot que se producía la fragmentación de la parp, lo cual sirvió también para determinar la actividad de las caspasas. por último, mostramos que la activación de la pkc es necesaria para la protección de las células frente a la apoptosis inducida por pg y que el efecto anti-apop
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización y purificación de un principio activo de origen bacteriano con actividad antitumoral«
- Título de la tesis: Caracterización y purificación de un principio activo de origen bacteriano con actividad antitumoral
- Autor: Beatriz Montaner Ramoneda
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 19/02/2001
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ricardo Pérez Tomás
- Tribunal
- Presidente del tribunal: jordi Domingo feliubaladó
- María isabel Fabregat romero (vocal)
- ernest Giralt lledo (vocal)
- Madrid cuevas Juan Francisco (vocal)