Tesis doctoral de Juan Jesús Vicente Ruiz
El factor de transcripción srf («serum response factor», factor de respuesta a suero) juega%&/un papel importante durante la diferenciación y la proliferación de muchos organismos. El gen ortólogo%&/a srf en dictyostelium discoideum, srfa, es imprescindible para la migración de los «slugs»y para la%&/correcta maduración de las esporas. Srfa muestra un patrón de expresión complejo a lo largo del desarrollo%&/debido al uso de promotores alternativos. Se ha estudiado la función de las distintas zonas promotoras en%&/el ciclo de vida de dictyostelium. La expresión de srfa dirigida por el promotor p2 fue capaz de recuperar%&/la migración y la morfología de los «slugs» de la cepa srfa-. Por otro lado, la expresión bajo el control del%&/conjunto de promotores p3+p4 rescató el fenotipo de esporulación asociado a la cepa srfa-.%&/El uso de una genoteca diferencial y de microarrays, ha permitido identificar genes cuya%&/expresión es dependiente de srfa en «slug» y estadios finales del desarrollo. Sig1 y syba se seleccionaron%&/para un estudio más detallado.%&/El gen sig1 (srfa induced gene 1) mostró una disminución de los niveles de mrna en la cepa%&/srfa- frente a la cepa control, en el estadio de «slug». Este gen codifica una pequeña proteína de 89%&/aminoácidos, y presenta una alta identidad con otros doce genes del cromosoma 2. Estos 13 genes se%&/encuentran asociados en dos grupos denominados grupo 1 y grupo 2. La expresión de estos genes ha sido%&/estudiada por rt-pcr usando oligonucleótidos específicos para cada grupo. Ambos grupos mostraron una%&/fuerte inducción entre las 10 y las 12 horas de desarrollo. Se ha abordado el estudio de su función mediante%&/la utilización de anticuerpos y la generación de cepas ko, de sobre-expresión y rnai. La inhibición del%&/desarrollo por anticuerpos específicos contra las proteínas de los genes del grupo 2, sugieren un papel en el%&/mantenimiento y progresión del estadio de «mound».%&/Syba (synaptobrevin a) homólogo al gen humano sinaptobrevina, muestra una expresión%&/dependiente de srfa en estadios finales del desarrollo. No se han podido generar cepas knock-out o de%&/rnai para estudiar la función de este gen. Células donde se sobre-expresa el gen syba muestran defectos%&/de crecimiento en hl5 (con tiempos de generación de entre 14-16 horas) y unos niveles reducidos de%&/fagocitosis y exocitosis. La expresión de proteínas quiméricas gfp-syba muestran una localización de la%&/proteína en pequeñas vesículas inmóviles en la periferia de la célula. Marcadores específicos para lisosomas,%&/golgi, retículo y macropinosomas, no co-localizan con la proteína gfp-syba en ninguno de los estadios%&/del tráfico vesicular analizados.
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio de los genes sig1 y syba, regulados por el factor de transcripción srfa, en dictyostelium discoideum.«
- Título de la tesis: Estudio de los genes sig1 y syba, regulados por el factor de transcripción srfa, en dictyostelium discoideum.
- Autor: Juan Jesús Vicente Ruiz
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 20/12/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Leandro Sastre Garzon
- Tribunal
- Presidente del tribunal: roberto Marco cuéllar
- Alberto García sáez (vocal)
- María Jesús Marzón calpena (vocal)
- Antonio Manuel Estévez García (vocal)