Tesis doctoral de Irene Oliver Vila
El objeto de estudio de esta tesis es el receptor cd84, que pertenece a la familia del cd150, a la vez englobada dentro de la superfamilia de las inmunoglobulinas. La familia del cd150 está compuesta por nueve receptores que comparten una elevada homología estructural, y que pueden presentar interacción homotipica o heterotfpica. Seis de los miembros de esta familia presentan en la cola citoplasmática al menos un motivo de unión a las proteínas adaptadores sap y eat-2. La deficiencia en el gen que codifica para la protefna sap (sh2d1a), es la causante de la aparición de una inmunodeficiencia ligada al cromosoma x, el síndrome de xlp, correspondiente a un desorden de baja incidencia, que se caracteriza por una elevada susceptibilidad al virus del epstein-barr. El cd84 se encuentra ampliamente expresado en la superficie de los leucocitos y es el único miembro de la familia que se encuentra expresado a niveles elevados en mastocitos en estado basal. Los mastocitos son las principales células efectoras en las reacciones alérgicas, aunque están implicados en muchos otros procesos, incluidos la inmunidad innata y la autoinmunidad. La vía clásica de activación de los mastocitos se inicia con la unión de la ige al receptor de alta afinidad para la ige (fcepsilonri) y da lugar a la liberación de histamina y muchos otros mediadores. Las respuestas mastocitarias requieren una regulación muy precisa y está mediada por un amplio abanico de factores y moléculas. El objetivo de estudio de esta tesis ha sido determinar la función del receptor cd84 en la activación mastocitaria, dada la elevada expresión de este inmunoreceptor en mastocitos, y las implicaciones de este tipo celular en la regulación de las respuestas del sistema inmunitario. mediante estudios de sobre-expresión del receptor cd84 en una linea mastocitaria de rata, rbl-2h3, caracterizamos el cd84 come un nuevo receptor inhibidor de la cascada de señalización iniciada por el receptor de alta afinidad a la ige. Demostramos que el receptor cd84 inhibe tanto eventos tempranos (como la señalización de calcio, la reorganización del citoesqueleto, la degranulación y la fosforilación de mapk), asi como eventos tardíos (síntesis de atocinas) mediante la interacción homotipica, donde el receptor actúa como su propio ligando. Mediante la generación de mutantes puntuales para las cuatro tirosinas que el receptor cd84 presenta en su cola citoplasmática, diseccionamos la implicación de cada una de ellas en el mecanismo inhibitorio del cd84, y comprobamos que las tirosinas responsables de la inhibición del cd84 son las que se encuentra en las posiciones 279 y 324. Por otro lado, las tirosinas 262 i 299, que se encuentra englobadas en motivos de unión a las proteínas adaptadoras sap y eat-2, no participan en el mecanismo inhibitorio del receptor cd84, determinando que la función negativa del receptor es independiente de sap. Mediante estudios bioquímicos, comprobamos que las moléculas adaptadoras c-cbl y dok-1, participan en el mecanismo inhibitorio del cd84. Hicimos también estudios de transfección en células cos, con la finalidad de establecer las cinasas implicadas en la fosforilación del receptor cd84 y determinamos lyn i fps/fes como las cinasas principales en la fosforilación de las tirosinas 279 i 324, respectivamente. Finalmente utilizamos una linea mastocitaria humana, lad-2, que nos ha permitido corroborar los efectos observados en la linea rbl-2h3 en un sistema fisiológicamente más cercano al humano. Comprobamos que el efecto inhibitorio del receptor cd84, se mantiene en los eventos tempranos estudiados en lad-2, y confirmamos también en esta linea celular, la implicación de dok-1 en la señalización negativa del cd84. Los datos obtenidos en esta tesis, perfilan al receptor cd84 como una molécula importante en la función de los mastocitos y una posible diana terapéutica en alergias inflamatorias.
Datos académicos de la tesis doctoral «Papel del receptor cd84 en la activación mastocitaria«
- Título de la tesis: Papel del receptor cd84 en la activación mastocitaria
- Autor: Irene Oliver Vila
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 23/06/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Margarita Martín Andorra
- Tribunal
- Presidente del tribunal: enric Espel masferrer
- Fernando De mora pérez (vocal)
- (vocal)
- (vocal)