Tesis doctoral de Ana Rincon Vela
1. Introdución 1.1 defectos en el metabolismo celular de cobalaminas. 1.1.1 aciduria metilmalónica aislada. 1.1.2 homocistinuria. 1.2 análisis funcional de variantes alélicas. Nuevas aproximaciones terapéuticas. 1.3 relación genotipo-fenotipo. 2. Objetivos 3. Materiales y métodos 3.1 materiales. 3.1.1 reactivos y aparatos. 3.1.2 material biológico: pacientes, líneas celulares establecidas y vectores plasmídicos. 3.2 métodos 3.2.1 aislamiento de ácidos nucleicos 3.2.2 técnicas de amplificación de ácidos nucleicos 3.2.3 cultivo celular 3.2.4 cuantificación de mrna mediante qrt-pcr 3.2.5 construcción de minigenes y análisis in vitro de splicing 3.2.6 transfección de oligonucleótidos antisentido tipo morfolinos y vivo- morfolinos en fibroblastos. 3.2.7 análisis por microarray 3.2.8 medida del stress celular 3.2.9 soporte informático 13 4. Resultados 4.1 análisis genético en pacientes con aciduria metilmalónica aislada tipo mut, cblb y cbla y combinada con homocistinuria tipo cble. 4.1.1 análisis de mutaciones en el gen mmaa. 4.1.2 análisis de mutaciones en el gen mmab. 4.1.3 análisis de mutaciones en el gen mut. 4.1.4 análisis de mutaciones en el gen mtrr. 4.2 estudios funcionales y estructurales de mutaciones identificadas en pacientes con aciduria metilmalónica aislada. 4.2.1 análisis del efecto de las mutaciones en la estabilidad del mrna. 4.2.2 estudios funcionales de mutaciones localizadas en secuencias conservadas de splicing. 4.2.2.1 estudio de la mutación c.291-1g>a (paciente 13469) 4.2.2.2 estudio de la mutación c.584g>a (pacientes 19235 y 19244) 4.2.2.3 estudio de la mutación c.562g>c (paciente 21431) 4.2.3 estudios funcionales de mutaciones localizadas en el interior de intrones. 4.3 terapias moduladoras de mutaciones de splicing en aciduria metilmalónica. 4.3.1 restauración del splicing correcto utilizando oligonucleótidos antisentido. 4.3.2 restauración de la actividad enzimática mcm en líneas de fibroblastos de pacientes. 4.3.3 análisis del efecto de transfección sobre el stress celular.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterizacion molecular y terapia antisentido en aciduria metilmalonica aislada.«
- Título de la tesis: Caracterizacion molecular y terapia antisentido en aciduria metilmalonica aislada.
- Autor: Ana Rincon Vela
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 04/11/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Belen Perez Gonzalez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: fernando Valdivieso amate
- Mª luz Couce pico (vocal)
- mercedes Martinez-pardo casanova (vocal)
- José María Medina jimenez (vocal)