Tesis doctoral de María Del Pilar Riobó Agulla
La presencia de ficotoxinas en alimentos de origen marino ha tomado una gran relevancia en los últimos años, algunas de ellas de muy tóxicas como es el caso de la palitoxina, producida por antozoos y dinoflagelados bentónicos del género ostreopsis. Esta amenaza puede llegar a ser más real que posible pues en la actualidad las distintas especies de ostreopsis se hallan ampliamente distribuidas por todo el mundo, relacionado probablemente con el cambio climático y/o la eutrofización. Existen suficientes casos documentadosde intoxicación por consumo de peces y crustáceos y se sospecha que la palitoxina sea la posible causa de intoxicaciones respiratorias de bañistas en italia y españa, al coincidir con fuertes aumentos de ostreopsis en las playas frecuentadas por los mismos. a la vista de las limitaciones que presentaban los métodos químicos y biológicos para el análisis de la palitoxina se procedió a aislar y caracterizar diferentes cepas de ostreopsis tanto del mediterráneo como de la macaronesia y cultivarlas en laboratorio en condiciones controladas con la finalidad de generar biomasa a partir de la cual extraer palitoxinas para su estudio. como resultado, en la presente tesis se recoge la primera cita de dos especies del género ostreopsis en el mediterráneo (o. Cf. Siamensis y o. Ovata) y además, empleando las herramientas analíticas disponibles al inicio de la misma, se confirma por primera vez la presencia de palitoxina y/o análogos en ostreopsis en el mediterráneo. Sin embargo, con la metodología disponible en los inicios no se pudieron encontrar diferencias a nivel toxinológico entre ambas especies, de ahí la necesidad de mejorar tanto las técnicas analíticas como biológicas para poder detallar los perfiles de toxinas de las distintas especies y disponer de herramientas que resultaran fiables a nivel cuantitativo. El trabajo en este sentido culminó con la propuesta de un nuevo método de cromatografía líquida para determinación de palitoxina, en el que se aplica por primera vez la derivatización precolumna y detección por fluorescencia. Dicho método fue aplicado con éxito en la determinación y cuantificación de palitoxina en muestras de ostreopsis resultando un método muy robusto y sensible. Si bien los métodos analíticos son necesarios para confirmar la presenciade palitoxina, los ensayos biológicos permiten su detección y cuantificación y tienen la ventaja de definir síntomas característicos en modelos de diferente complejidad (ratones, células …). A pesar de los problemas éticos y logísticos inherentes a los bioensayos con mamíferos, tales ensayos se utilizan ampliamente en el seguimiento de ficotoxinas marinas por su fiabilidad y permiten comprobar la presencia de componentes tóxicos pobremente definidos o inclusive desconocidos que podrían tener repercusión en la salud pública. Es por ello, que una descripción cuidadosa y detallada de la sintomatología en el ratón es de vital importancia a este nivel para dar la primera alerta sobre la presencia de la toxina. En esta tesis se completa la descripción, que hasta la fecha se encuentra en la bibliografía, de la sintomatología en el ratón por inyección i.P. De palitoxina, siendo la primera vez que se concretan los síntomas iniciales registrados en los primeros minutos. Por otro lado, la aplicación de 2 modelos algebráicos como son el logístico y el modelo de weibull, permitió realizar una descripción adecuada y consistente de la dinámica toxicológica de la palitoxina; fijando los valores dl50 y el límite de detección con intervalos de confianza muy satisfactorios. En cuanto al tiempo de observación, se recomienda 24 h en base al establecido a nivel internacional para toxinas lipofílicas y en consecuencia se define la unidad ratón para palitoxina como la cantidad de toxina que mata a un ratón al cabo de 24 h desde su inyección i.P. Otro método biológico ampliamente utilizado para la determinación de palitoxina es el ensayo de actividad hemolítica, pero en las condiciones en las que se lleva a cabo en los distintos laboratorios resulta muy sensible al error experimental. Para solucionar este problema se aborda el estudio en profundidad de la dinámica toxicológica de la palitoxina en cuanto a su acción hemolítica, cinética, inhibición por ouabaina y respuesta a la temperatura. Como colofón a los resultados obtenidos se propone un método que permite cuantificar palitoxina y/o análogos en muestras biológicas en forma de palitoxina equivalentes.
Datos académicos de la tesis doctoral «Palitoxinas, ensayos biológicos y métodos químicos para su determinación en organismos marinos«
- Título de la tesis: Palitoxinas, ensayos biológicos y métodos químicos para su determinación en organismos marinos
- Autor: María Del Pilar Riobó Agulla
- Universidad: Vigo
- Fecha de lectura de la tesis: 06/06/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- José María no Franco Soler
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jorge Diogene fadini
- mercedes Masó agustina (vocal)
- María teresa Fernández sánchez (vocal)
- Miguel Morado García (vocal)