Tesis doctoral de Rebeca Santaolalla Sala
La enfermedad inflamatoria intestinal (eii) es una patología inflamatoria crónica de etiología desconocida que afecta al tubo digestivo. Dentro de esta entidad se encuentran la enfermedad de crohn (ec) y la colitis ulcerosa (cu). El tratamiento con corticoesteroides es la estrategia terapéutica de primera elección en los brotes de actividad moderados y graves de estas patologías. Debido a que los corticoesteroides producen frecuentemente efectos secundarios, y en ocasiones graves, la detección precoz de la corticorefractariedad es de crucial importancia para evitar una prolongada e innecesaria exposición a éstos y así poder iniciar de forma más precoz tratamientos alternativos. la apoptosis es uno de los mecanismos reguladores de la homeostasis inmunológica más importantes, y su alteración puede conducir a una exagerada respuesta inmunológica con tendencia a la cronicidad. En este sentido, se ha publicado que la ec es una enfermedad con resistencia a la apoptosis en los linfocitos t de la lámina propia, en la mucosa intestinal. Además se ha sugerido que diversos fármacos inmunosupresores (esteroides, infliximab, metotrexate) actúan induciendo la apoptosis de las células que intervienen en la respuesta inflamatoria. esta tesis doctoral parte de la hipótesis de que la mala respuesta a los corticoesteroides (corticodependencia y corticorefractariedad) se podría predecir cuantificando la apoptosis de diferentes tipos de células inflamatorias. En base a esta hipótesis, los objetivos planteados en este trabajo fueron: 1) evaluar si la apoptosis de linfocitos t, células plasmáticas y macrófagos de la mucosa intestinal se encuentra disminuida en pacientes con eii refractarios y dependientes de esteroides; 2) evaluar si la expresión del factor de transcripción nfkb, de citocinas activadas por este factor nuclear, de tnfalfa y de proteínas accesorias de su receptor (tnfr1) se encuentra aumentada en pacientes refractarios y dependientes de esteroides respecto de los sensibles; y 3) evaluar si la disminución de la apoptosis de células inflamatorias, activación del factor de transcripción nfkb y expresión de tnfalfa en la mucosa intestinal permiten predecir la respuesta al tratamiento con esteroides. en este estudio se incluyeron 58 pacientes con eii activa (32 cu y 26 mc) sin tratamiento inmunosupresor previo, y 23 controles. A todos los pacientes se les realizó una colonoscopia, con toma de biopsias de la mucosa inflamada, en el momento de la inclusión y al cabo de 7-10 días de tratamiento con corticoesteroides. Los pacientes se clasificaron, en función de su respuesta al tratamiento, como sensibles, dependientes y refractarios a corticoesteroides, en base a criterios clínicos, endoscópicos e histológicos. Las muestras obtenidas se analizaron mediante técnicas de citometría, histología, y de biología molecular. Para inmunohistoquímica se determinó la cantidad de células apoptóticas en la lámina propia intestinal, mediante el marcaje de caspasa-3. La activación de la respuesta inflamatoria se analizó con los marcadores nfkbp65, tnfalfa y traf2. Para citometría de flujo se analizó el porcentaje de apoptosis de linfocitos t y b, células plasmáticas y macrófagos, mediante un doble marcaje con anexina-v (apoptosis) y 7-aad (viabilidad celular) la expresión de las citocinas pro y antiinflamatorias ifngamma, il-1alfa, tnfalfa, il12p40, il-4, il-10, y el cociente de expresión de bax/bcl2, se analizaron por pcr en tiempo real. Finalmente, se analizó la vía de señalización del tnfr1 que conduce a la supervivencia celular e inflamación, mediante la determinación del factor de transcripción nfkb activado (p65-p50).
Datos académicos de la tesis doctoral «Balance entre inflamación y apoptosis en la mucosa intestinal de pacientes con enfermedad de crohn y colitis ulcerosa«
- Título de la tesis: Balance entre inflamación y apoptosis en la mucosa intestinal de pacientes con enfermedad de crohn y colitis ulcerosa
- Autor: Rebeca Santaolalla Sala
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 28/01/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María Esteve Comas
- Tribunal
- Presidente del tribunal: miquel í ngel Gassull duró
- Jesús García gil (vocal)
- (vocal)
- (vocal)