Tesis doctoral de Andrés Medrano Muñoz
Actinobacillus pleuropneumoniae es una bacteria gramnegativa que provoca la pleuroneumonía porcina. en este trabajo se ha procedido a la producción y purificación, mediante técnicas de biología molecular, de antígenos proteicos de esta bacteria y a su uso en la formulación de una vacuna por subunidades y de un elisa para diagnóstico. Los cuatro antígenos escogidos fueron dos proteínas de membrana externa (tbp1 y tbp2) y dos exotoxinas (apxi y apxiii). para la detección de tbp1 se utilizó como sonda el gen tbp2. Tras su identificación, el gen tbp1 fue clonado en el vector puc119 obteniéndose su secuencia completa que se depositó en el genbank z49708, habiéndose obtenido su patente europea ep0733708 y americana 08/624655. Finalmente, el resultado fue publicado (daban et al., 1996; medrano et al., 1997) (anexos vii.1 y vii.2). Para la clonación de apxia y apxiiia, al conocerse sus secuencias, se diseñaron cebadores de pcr con mutaciones que creaban dianas de restricción, permitiendo así la amplificación sobre el genoma y posterior clonación en vectores de expresión. una vez clonados los genes codificantes para las cuatro proteínas se pasó a la producción heteróloga en escherichia coli. Para ello se utilizaron diversos vectores: pmal, que generan como producto de expresión una proteína de fusión con la mbp (maltose binding protein) y vectores de la gama pet, con los cuales se ha desarrollado la mayor parte del trabajo. A partir de los extractos obtenidos se procedió a la purificación de los antígenos por cromatografía de afinidad aprovechando fusiones con colas de histidinas. tras producir y purificar los cuatro antígenos, se procedió a la elaboración de una vacuna experimental. Se desarrollaron tres protocolos de vacunación, estudiándose la inocuidad y efectividad de esa vacuna. Se determinó la respuesta humoral a partir de las muestras de suero obtenidas en los ensayos de vacunación mediante
Datos académicos de la tesis doctoral «Expresión recombinante en e.coli de antígenos de actinobacillus pleuropneumoniae para vacunación y diagnóstico«
- Título de la tesis: Expresión recombinante en e.coli de antígenos de actinobacillus pleuropneumoniae para vacunación y diagnóstico
- Autor: Andrés Medrano Muñoz
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 04/04/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Enrique Querol Murillo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: francesc xavier Avilés puigvert
- carles Casas alvero (vocal)
- Llorení§ i duran rafel (vocal)
- enric Espuña masó (vocal)