Tesis doctoral de Miguel García Díaz
Mediante búsquedas por analogía de secuencia se ha identificado la secuencia de un nuevo gen humano que codifica una nueva adn polimerasa de la familia x. Esta nueva proteína se ha denominado adn polimerasa lambda (pol). La pol es homóloga a la pol beta, una adn polimerasa de reparación que participa en mamíferos en el proceso de reparación por escisión de base. La pol se expresa en todos los tejidos analizados, con especial preponderancia en testículo. Además, su expresión es exclusivamente nuclear. se ha llevado a cabo la sobreexpresión de la pol en células de e.Coli, así como su purificación, demostrando que la pol posee una actividad adn polimerasa intrínseca. la caracterización de sus características enzimáticas ha permitido comprobar que se trata de un enzima dirigido por el molde y distributivo, aunque su procesividad se incrementa en sustrato de tipo gap, lo que sugiere que estos moldes podrían ser su sustrato fisiológico. La medida de los parámetros cinéticos de la pol ha permitido demostrar que se trata de un enzima con una elevada afinidad por nucloeótico, sugiriendo un papel de este enzima en situaciones en que los niveles de precursores nucleotídicos se encuentren disminuidos. además de su actividad de polimerización, la pol posee un actividad desoxirribosa fosfato liasa (drp liasa), lo que sugiere su participación en el proceso de reparación por escisión de base. De hecho, es posible reconstruir la reacción de reparación de un uracilo in vitro empleando pol. se han llevado a cabo medidas de la fidelidad de síntesis de la pol humana. en cuanto a las sustituciones de base, se trata de un enzima con una fidelidad modesta, algo inferior a la de la pol beta. Sin embargo, la pol comete con una frecuencia extraordinaria errores de deleción: se trata de la adn polimerasa caracterizada hasta el momento con la mayor frecuencia de comisión de errores de deleción. el análisis de los errores
Datos académicos de la tesis doctoral «Identificación y caracterización de una nueva adn polimerasa eucariótica: la adn polimerasa lambda«
- Título de la tesis: Identificación y caracterización de una nueva adn polimerasa eucariótica: la adn polimerasa lambda
- Autor: Miguel García Díaz
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 31/03/2003
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Luis Blanco Dávila
- Tribunal
- Presidente del tribunal: margarita Salas falgueras
- Andrés Aguilera lópez (vocal)
- María antonia Blasco marhuenda (vocal)
- José Fernandez piqueras (vocal)