Tesis doctoral de Carrasco Cornejo M. Luisa
Durante las últimas décadas, los vectores de transferencia génica más usandos en terapia génica humana han sido basados en diferentes tipos de retrovirus. estos vectores presentan, sin embargo, una capaciedad limitada en cuanto al tamaño del transgén que puede alojar. La presente tesis doctoral se centra en el estudio de la capacidad maxima de transducción de vectores basados en el virus de la leucemia murina akv para su posible utilización en terapia génica. se han construido varios vectores basados en el virus akv conteniendo genomas de tamaños crecientes, y se ha analizado su capacidad de replicación en function del tamaño genómico. Se ha utilizado para ello una técnica (sistema de maxi-virus) desarrollada y reportada en nuestro laboratorio en 1999, que se basa en la inserción, en la región u3 del ltr, de un ires que dirige la expressión del gen testigo neo insertado a continuación (virus akvbi-neo). a partir de este virus, y mediante la inserción en su parte previa de fragmentos de tamaño creciente de dna del fago lambda se generaron mega-vectores cuya capacidad de transducción y estabilidad fueron estudiados. Cuando el tamaño del genoma viral sobrepasó las 10 kb, la eficiencia de transducción decreció de 10 5 to 10 1 dfu/ml, dependiendo del tamaño del inserto. en este trabajo se ha analizado los distintos pasos en el ciclo de replicación para determinar en que estado/s son deficientes estos vectores y así explicar la reducción obtenida en la capacidad de transducción. la segunda parte de la tesis se centra en el estudio un maxi-virus quimérico, en el cual el promotor propio del virus akv se ha sustituido por el correspondiente al virus sl3-3-mlv. Este maxi-virus contiene un «cassette» (formado por el ires seguido del gen egfp), insertado en la región u3 del ltr. Se han analizado los cambios tanto en la replicación del vector como en la expresión del gen testigo durante seis pases del virus. En l
Datos académicos de la tesis doctoral «Maximal transduction capability of akv-mlv-based vectors lengthened genomes and their replication, does size matter?«
- Título de la tesis: Maximal transduction capability of akv-mlv-based vectors lengthened genomes and their replication, does size matter?
- Autor: Carrasco Cornejo M. Luisa
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 04/06/2004
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Finn Skou Pedersen
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Juan Ortin monton
- marc Piechaczyk (vocal)
- dieter Klein (vocal)
- José Alcami pertejo (vocal)