Tesis doctoral de Esther Castellano Sanchez
Con el fin de esclarecer la posible especificidad – o redundancia- funcional de h-ras y n-ras, hemos analizado los patrones de expresión genómica y proteómica de fibroblastos inmortalizados a partir de embriones knockout para los genes h-ras, n-ras, así como de dobles knockout h-ras/n-ras en condiciones de crecimiento estacionario y en respuesta a suero (ayuno de suero durante 24 horas, estimulación con suero durante 1 hora y estimulación con suero durante 8 horas). Mediante el software rma y el paquete estadístico sam, se realizó una normalización global inter-chip robusta y seleccionamos los genes con cambios de expresión significativa en las líneas celulares knockout respecto a las control en las condiciones de estudio. en primer lugar pudimos comprobar que la expresión y activación de cada uno de los miembros individuales de la familia ras está regulada de forma independiente, ya que la ausencia de n-ras y/o h-ras no causan cambios compensatorios en la expresión o en la activación de las otras isoformas de ras. Además, los análisis cuantitativos y cualitativos de los patrones transcripcionales indican que, en todas las condiciones de estudio, n-ras ejerce mayor influencia en el transcriptoma celular que h-ras. la comparación funcional de las listas de genes expresados diferencialmente confirma la presencia de firmas moleculares asociadas a la ausencia de h-ras y n-ras. Así, h-ras está implicado en procesos de proliferación y desarrollo, mientras que n-ras lo está en apoptosis y respuesta inmune, funciones que controla a través de la vía de erk/mapk. en cuanto a los perfiles transcripcionales en respuesta a suero, los datos obtenidos sugieren la existencia de cierto solapamiento funcional entre ambos loci h-ras y n-ras tras la privación de suero durante 24 horas. Además, la estimulación con suero sugiere que n-ras está más implicado en la regulación de genes de respuesta inmediata y de la vía de erk/mapk, mientras que h-ras está más implicado en la regulación de la vía de pi3k. en resumen, nuestros resultados apoyan la teoría de la especificidad de función para h-ras y n-ras ya que, aunque pueda existir algún tipo de solapamiento funcional entre ambas proteínas, en la mayoría de los casos los patrones transcripcionales regulados por h-ras y n-ras son muy diferentes.
Datos académicos de la tesis doctoral «Análisis de los patrones de expresión genómica y proteómica de fibroblastos derivados de ratones knockout para h-ras y n-ras«
- Título de la tesis: Análisis de los patrones de expresión genómica y proteómica de fibroblastos derivados de ratones knockout para h-ras y n-ras
- Autor: Esther Castellano Sanchez
- Universidad: Salamanca
- Fecha de lectura de la tesis: 25/05/2007
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Eugenio Miguel Angel Santos De Dios
- Tribunal
- Presidente del tribunal: xose ramon Garcia bustelo
- Javier León serrano (vocal)
- montserrat Bach elias (vocal)
- José María Rojas cabañeros (vocal)