Tesis doctoral de Jordi Minguillón Pedreño
El nfat5 es un factor de transcripción de la familia rel la cual incluye a los nfatc y los nf-kb. El nfat5 presenta homología con los demás miembros de la familia en el dominio de unión al dna o dominio rel. Aunque su homología es mayor con los nfatc, el nfat5 difiere de éstos en que no es capaz de unir los factores de transcripción jun y fos (ap1) ni presenta motivos de unión a la calcineurina. En cambio, une el dna en forma dimérica y la estructura de su dominio de unión al dna es similar a la de los nf-kb.%&/El mrna del nfat5 se detecta en numerosos tejidos y su proteína está presente en el timo, cerebro, y linfocitos activados en ratones adultos y en la mayoría de los tejidos embrionarios. La localización subcelular de este factor varía en determinados tipos celulares, desde predominantemente citoplásmica a nuclear.%&/El nfat5 es activado en respuesta a hipertonicidad, por la activación del receptor de linfocitos t y por ligandos de la integrina a6b4. El nfat5 regula genes osmoprotectores (smit, bgt1, ar y hsp70, entre otros) y citoquinas (tnfa y linfotoxina b) en respuesta a hipertonicidad. Por otro lado, el nfat5 participa en procesos no relacionados con la respuesta a hipertonicidad, tales como la migración de células de carcinoma, la migración y diferenciación de células de músculo esquelético y la replicación del virus hiv.%&/Los objetivos iniciales de esta tesis fueron: 1) identificar y caracterizar funcionalmente proteínas asociadas al nfat5 y 2) identificar y caracterizar otros tipos de estímulos activadores de este factor. %&/La búsqueda de proteínas asociadas al nfat5 no dio los resultados esperados y sólo identificamos la hsp70. Sin embargo, la búsqueda de estímulos reguladores del nfat5 llevó al hallazgo de que este factor de transcripción es activado por y regula la función de los receptores tipo toll (tlr), una familia de receptores que responden a patrones moleculares asociados a patógenos (pamp), esenciales para la respuesta inmunitaria innata y adaptativa.%&/La vía de los tlr es capaz de activar al nfat5 e inducir su expresión de forma dependiente de dosis en macrófagos murinos. Nuestros experimentos muestran que el nfat5 es importante para la expresión de diversos genes inducidos por los tlr, como la inos, el tnfa, la il6, la il12b, la cox2 y el rantes. En este sentido, la produción de la inos y la il6 fue deficiente en macrófagos nfat5-/- en respuesta tanto a concentraciones bajas como altas de ligandos de los tlr, mientras que la producción del tnfa y la il12b en células deficientes para el nfat5 fue inferior a la de macrófagos nfat5+/+ sólo en respuesta a concentraciones bajas de ligandos de los tlr, pero relativamente normal en respuesta a altas dosis de estímulo.%&/Hemos caracterizado en detalle la regulación de uno de los genes más sensibles a la ausencia del nfat5, la inos, y determinado que el nfat5 regula la actividad de su promotor. Además, experimentos de inmunoprecipitación de cromatina muestran que el nfat5 es capaz de unirse directamente al promotor de la inos in vivo en macrófagos estimulados con ligandos de los tlr. %&/Finalmente, experimentos actualmente en curso muestran que los ratones deficientes para el nfat5 presentan una producción exacerbada del tnfa durante el choque séptico inducido por altas dosis de lps in vivo. Este resultado contrasta con la deficiencia en la inducción del tnfa observada in vitro en macrófagos nfat5-/- y estamos estudiando posibles causas que expliquen esta diferencia.%&/En este trabajo de tesis doctoral hemos identificado y caracterizado una nueva función del nfat5, la regulación de genes activados por la vía de los tlr, importantes para la respuesta inmunitaria innata y adaptativa a una amplia variedad de patógenos. Nuestros resultados muestran que el nfat5 es un regulador importante en la ruta de los tlr, jugando un papel en la actividad de varios miembros de esta familia de receptores, tal y como lo hacen los factores de transcripción nf-kb e irf5.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización funcional de mecanismos que regulan el factor de transcripción nfat5«
- Título de la tesis: Caracterización funcional de mecanismos que regulan el factor de transcripción nfat5
- Autor: Jordi Minguillón Pedreño
- Universidad: Pompeu fabra
- Fecha de lectura de la tesis: 24/01/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- José Francisco Aramburu Beltran
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Miguel Lopez botet arbona
- pablo Engel rocamora (vocal)
- enric Espel masferrer (vocal)
- angel Corbi lopez (vocal)