Tesis doctoral de Mónica Sofía Guzmán Lenis
En la presente tesis doctoral se ha establecido y caracterizado un modelo in vitro de lesión excitotóxica por glutamato basado en cultivos organotipicos de médula espinal de rata postnatal de 7-8 dias. La optimizacion del medio de cultivo sin suero permite mantener los explantes más de 15 días in vitro con unas características en cuanto a la citoarquitectura y al número de motoneuronas similares a las obtenidas con medio con suero. Sobre los explantes se han establecido dos modelos de lesión; una mecánica y otra excitotóxica. Para establecer la lesión excitotóxica se han utilizado diferentes concentraciones de glutamato que provocan una respuesta dependiente de dosis. Esta respuesta se ha evaluado cuantificando la cantidad de homodímero-1 de etidio, un marcador fluorescente que es captado por las células dañadas, mediante el análisis de imágenes y cuantificando el número de motoneuronas supervivientes. Asimismo, se ha caracterizado que esta lesión está mediada principalmente por el receptor de glutamato nmda. Las motoneuronas en desarrollo postnatal sufren un cambio en las subunidades nr2a y nr3b el cual se mimetiza en los explantes organotípicos en nuestras condiciones de cultivo. Una vez estandarizado el modelo de lesión excitotóxica se ha utilizado para evaluar el efecto neuroprotector de diversos fármacos como son la eritropoyetina, el riluzol, el rolipram, el valproato, la región c terminal de la toxina tetánica y la metilprednisolona (ver trabajo i). este modelo ha sido de utilidad asimismo para analizar los mecanismos moleculares de algunos de estos fármacos como el fk506 y el ligando pre084 del receptor sigma 1. El análisis ha permitido establecer que el fk506 preserva el parénquima tisular frente a la lesión, efecto que es favorecido por la modulación de los niveles de la chaperona hsp70 que el fk506 produce sobre la microglia (ver trabajo ii). Por último, se ha podido observar que el pre084 ejerce un efecto neuroprotector e inductor de la elongación neurítica en las motoneuronas del explante, y que dichos efectos son mediados por la pkc aunque no por la activación de creb (ver trabajo iii).
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio del efecto neuroprotector de tratamientos farmacológicos en un modelo in vitro de lesión excitotóxica de médula espinal de rata basado en cultivos organotípicos«
- Título de la tesis: Estudio del efecto neuroprotector de tratamientos farmacológicos en un modelo in vitro de lesión excitotóxica de médula espinal de rata basado en cultivos organotípicos
- Autor: Mónica Sofía Guzmán Lenis
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 16/01/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Catalina Casas Louzao
- Tribunal
- Presidente del tribunal: joan xavier Comella carnice
- José Antonio Del rio fernandez (vocal)
- (vocal)
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