Tesis doctoral de Marta Martín Flix
Atm (ataxia-telangiectasia mutated) y dna-pkcs (dna-dependent protein kinase, catalytic subunit) son dos proteínas pertenecientes a la familia de las pikks (phosphatidylinositol 3-kinase-related kinase) y ambas desarrollan importantes funciones en la vía de respuesta al daño en el dna (ddr). Atm y dna-pkcs son activadas en respuesta a las roturas de doble cadena del dna (dsbs) que se producen a consecuencia de las radiaciones ionizantes. Una vez activadas, ambas quinasas realizan funciones diferentes pero significativamente complementarias en esta vía. Atm es capaz de (1) parar el ciclo celular en cualquier fase; (2) activar diversas proteínas implicadas en la vía de reparación homóloga (hr) del dna y (3) en caso que el daño sea masivo y/o irreparable, inducir la activación de la vía de la apoptosis celular. Por su parte dna-pkcs es una de las principales proteínas perteneciente a la vía de reparación no homóloga del dna (nhej). Además de participar en la nhej, dna-pkcs activa y regula al resto de factores activos en esta vía. Finalmente, como atm, dna-pkcs también puede inducir la vía de la apoptosis en respuesta a un daño masivo. la ausencia de alguna de estas dos quinasas produce, en los individuos afectados, la aparición de síndromes de inestabilidad cromosómica. Las células derivadas de estos individuos son extremadamente radiosensibles y acumulan aberraciones cromosómicas. El objetivo de esta tesis doctoral es determinar qué factores contribuyen de manera específica a la radiosensibilidad y a la inestabilidad cromosómica de las células deficientes en atm y en dna-pkcs. Para ello nos dispusimos a analizar: (1) el espectro de aberraciones radio-inducidas en ambos tipos celulares; (2) la evolución y resolución de estas aberraciones a lo largo del tiempo; (3) la posible implicación del metabolismo telomérico en estas aberraciones y (4) la cinética de reunión de dsbs de las células deficientes en atm y de las células deficientes en dna-pkcs. Los resultados obtenidos demuestran que las células deficientes en dna-pkcs presentan una cinética de reunión de dsbs radio-inducidos significativamente más lenta que las células normales. Una reparación más lenta de las lesiones en el dna favorece la acumulación de fragmentos cromosómicos (1) y, a su vez, la reunión ilegítima de los mismos (2), justificando el espectro de aberraciones radio-inducidas obtenido en estas células. En cuanto a las células deficientes en atm, éstas presentan una cinética de reunión de dsbs normal, excepto por una fracción de las roturas, que permanece sin reparar a largos tiempos post-irradiación. Nos planteamos la posibilidad de que estas roturas no estuvieran siendo correctamente detectadas, y se realizó un análisis de la presencia de gamma-h2ax y mre11 en los extremos cromosómicos rotos. La mayoría de las deleciones presentes en las células deficientes en atm presentan marcaje con ambas proteínas en el punto de rotura, pero una fracción considerable de las mismas (25%) no presenta ningún tipo de marcaje. La acumulación de roturas pendientes de ser reparadas a largos tiempos post-irradiación (48 y 72 h) aparece como el principal factor responsable de la radiosensibilidad e inestabilidad cromosómica de estas células. Aunque su resolución no sea rápida, es de esperar que la fracción de roturas persistentes correctamente señalizadas por las proteínas de reparación sea finalmente reparada. Sin embargo, la fracción de roturas sin señalizar podría permanecer sin reparar por tiempo indefinido.
Datos académicos de la tesis doctoral «Inestabilitat cromosómica i radiosensibilitat en cél·lules defectives en atm i dna-pkcs«
- Título de la tesis: Inestabilitat cromosómica i radiosensibilitat en cél·lules defectives en atm i dna-pkcs
- Autor: Marta Martín Flix
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 12/12/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Anna Genesc? Garrigosa
- Tribunal
- Presidente del tribunal: lleonard Barrios sanrom?
- purificación Muñoz moruno (vocal)
- (vocal)
- (vocal)