Tesis doctoral de Alfonso Blazquez Castro
Es conocida la acción citotóxica de las especies reactivas de oxígeno (ros), que desemboca en numerosos trastornos y enfermedades. Sin embargo, recientemente se está demostrando la capacidad de algunas ros para actuar como moléculas señalizadoras en la fisiología celular normal. En concreto, las ros se están vinculando en procesos tales como la proliferación celular y la regeneración tisular. Parece, por tanto, interesante definir metodologías que permitan, mediante la manipulación de la concentración celular de ros, modular la tasa proliferativa celular con objeto de emplearlas, eventualmente, en la regeneración de un tejido dañado. En este sentido, la aplicación de un tratamiento fotodinámico moderado puede ofrecer la posibilidad de incrementar la tasa de proliferación celular en un tejido susceptible de ser iluminado, como la piel. en este trabajo se han estudiado los efectos de un tratamiento fotodinámico moderado sobre la proliferación celular en la línea celular establecida hacat de queratinocitos humanos. Como fotosensibilizador de la acción fotodinámica se ha utilizado la protoporfirina ix, un metabolito endógeno que forma parte de la ruta de síntesis de citocromos celulares. Para elevar los niveles de protoporfirina ix las células se incubaron con metil-amino-levulinato (mal), un precursor del ácido 5-amino-levulínico, que es el primer intermediario en la ruta de síntesis de la protoporfirina ix. Como fuente de irradiación se utilizó un iluminador de diodos emisores de luz que emitía en el rango rojo del espectro visible. los resultados obtenidos indican que la aplicación de un tratamiento fotodinámico moderado modula la proliferación celular en las células hacat. la incubación durante 5 h con mal 0,1 mm, para promover la producción endógena de protoporfirina ix, y la posterior iluminación con luz roja durante 10 minutos (dosis de 3,72 j/cm2) provocaron un incremento puntual del número de células hacat que entraron en ciclo celular y realizaron la mitosis en las 24 h posteriores al tratamiento. el incremento de la proliferación celular fue estudiado mediante diversas técnicas complementarias, tales como el ensayo de viabilidad celular del mtt, el recuento del porcentaje de células en mitosis dentro de una población celular determinada (índice mitótico), la medida de la distribución de ciclo celular mediante citometria de flujo, el marcaje con 5(6) carboxifluoresceína diacetato n-succinimidil ester (cfse), la tinción para el antígeno nuclear ki-67 o el recuento del porcentaje de células que presentaron cuerpos de flemming. en paralelo se han realizado otros estudios para comprender el mecanismo de acción por el cual el tratamiento fotodinámico modula la proliferación en las células hacat. Estos estudios han demostrado un aumento en la acumulación de protoporfirina ix conforme mayor fue la concentración de mal a la que estuvieron expuestas las células. El tratamiento fotodinámico elevó los niveles intracelulares de ros a través de la producción de oxígeno singlete. También se ha demostrado que el tratamiento eleva significativamente resumen ii los niveles de ciclina d1 en las células tratadas. Se ha comprobado que, para que tenga lugar la estimulación celular descrita, deben de funcionar correctamente tanto la ruta de la quinasa src como el complejo formador de ros denominado nox (nadph oxidase), y que el tratamiento provocó variaciones en la concentración de ca2+ citoplasmático, fenómeno que se ha vinculado con la estimulación de proliferación celular. también se han observado modificaciones en la disposición de los microtúbulos y de los microfilamentos de actina tras el tratamiento. Estas modificaciones alteraron temporalmente la morfología celular de forma similar a la observada cuando los queratinocitos reciben la señalización para iniciar un proceso de regeneración tisular. El tratamiento provocó un aumento significativo en la producción del factor de crecimiento vascular endotelial (vegf), que es el factor angiogénico más potente. en conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo ponen de manifiesto la posibilidad de utilizar tratamientos fotodinámicos moderados para modular la tasa proliferativa en queratinocitos humanos, con su posible aplicación como metodología para optimizar procesos de regeneración tisular.
Datos académicos de la tesis doctoral «Modulacion de la proliferacion de queratinocitos humanos por especies reactivas de oxigeno generadas mediante tratamiento fotodinamico«
- Título de la tesis: Modulacion de la proliferacion de queratinocitos humanos por especies reactivas de oxigeno generadas mediante tratamiento fotodinamico
- Autor: Alfonso Blazquez Castro
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 23/07/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María ángeles Juarranz De La Fuente
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ildefonso Bonilla mangas
- Miguel ángel Miranda alonso (vocal)
- Luisa María Botella cubells (vocal)
- María laura García bermejo (vocal)