Tesis doctoral de Ricardo Antonio Gargini
Introducción…………………………………………………………………………………………..5 muerte celular programada…………………………………………………………………………..5 necrosis…………………………………………………………………………………………………….5 apoptosis……………………………………………………………………………………………………9 muerte independiente de caspasas………………………………………………………………14 cáncer………………………………………………………………………………………………….16 sistema lis/lin/go………………………………………………………………………………………18 implicación de la muerte celular en la carcinogénesis…………………………………….18 autofagia………………………………………………………………………………………………….20 autofagia, un mecanismo de muerte celular muy eficiente………………………………22 mitofagia: reciclando la mitocondria, un juego entre la vida y la muerte……………23 tumorigénesis y autofagia: un equilibrio de muerte………………………………………..24 objetivos………………………………………………………………………………………………25 materiales y métodos……………………………………………………………………………..27 reactivos especiales………………………………………………………………………………….27 anticuerpos………………………………………………………………………………………………27 plásmidos…………………………………………………………………………………………………28 construcciones de rna de interferencia………………………………………………………..30 vectores virales…………………………………………………………………………………………30 adenovirus……………………………………………………………………………………………………30 lentivirus………………………………………………………………………………………………………30 retrovirus………………………………………………………………………………………………………31 cultivos celulares………………………………………………………………………………………31 medios y condiciones de cultivo…………………………………………………………………….31 células………………………………………………………………………………………………………….31 obtención de cultivos primarios de explantes de tumores………………………………33 transfección de células………………………………………………………………………………33 determinación de la supervivencia celular…………………………………………………….33 índice ii infección con adenolis in vitro……………………………………………………………………..34 inmunofluorescencias………………………………………………………………………………..34 análisis de las modificaciones estructurales de la mitocondria ………………………..34 marcaje de autofagosomas…………………………………………………………………………35 medición de estrés oxidativo……………………………………………………………………….35 medición del potencial de membrana……………………………………………………………35 análisis del tipo de muerte por citometría de flujo (anexina v-fitc/ip o anexina v-pe/7-aad)……………………………………………………………………………….36 ensayo de formación de colonias…………………………………………………………………36 proteínas………………………………………………………………………………………………….36 obtención de extractos de proteínas totales……………………………………………………….36 preparación de fracciones enriquecidas citosólicas y mitocondriales……………………..37 electrotransferencia e inmunodetección de proteínas (western blot)……………………..37 tratamiento de los ratones………………………………………………………………………….37 análisis estadístico de los datos…………………………………………………………………..38 resultados……………………………………………………………………………………………39 el sistema linamarasa/linamarina/glucosa oxidasa genera una rápida y eficiente muerte de las células tumorales…………………………………………………………………39 caracterización morfológica de la muerte inducida por el sistema combinado lis/lin/go…………………………………………………………………………………………………44 análisis de los mecanismos moleculares en la muerte celular inducida por daño mitocondrial en combinación con estrés oxidativo……………………………………..49 la combinación de cianuro con peróxido de hidrógeno mata a las células tumorales u-87 mg dañando las mitocondrias sin activar la caspasas y sin participación de aif…………………………………………………………………………………..55 la generación de daño mitocondrial agudo en combinación con estrés oxidativo es un potente inductor de autofagia…………………………………………………………………..58 daño mitocondrial, estrés oxidativo y proteínas de estrés………………………………………..58 participación de las vacuolas autofágicas en la muerte generada por el sistema lis/lin/go……………………………………………………………………………………………………….61 participación de los lisosomas en la fase degradativa de la muerte por autofagia…….68 inducción de muerte por autofagia in vivo en un modelo de xenotransplante de índice iii tumores humanos…………………………………………………………………………………………..70 estudio de proteínas implicadas en el mecanismo de autofagia………………………………..71 estrecha relación entre apoptosis y autofagia: el bloqueo de los mecanismos de generación de autofagia facilita la activación de apoptosis y viceversa……….72 la transformación tumoral sensibiliza a las células a morir por autofagia demostrando su potencial terapéutico…………………………………………………………75 discusión……………………………………………………………………………………………79 capacidad citotóxica y terapéutica del sistema lis/lin/go………………………………..79 cambio entre pérdida o mantenimiento de la integridad de membrana plasmática………………………………………………………………………………………………81 lisosomas: ¿es hsp70 un protector universal de la muerte celular?………………..82 el papel de la mitocondria en la muerte desencadenada por el sistema lis/lin/go…………………………………………………………………………………………………83 autofagia, mitofagia y muerte celular……………………………………………………………87 autofagia, apoptosis y tumorigénesis desencadenada por oncogenes……………89
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio del mecanismo de muerte asociado a la terapia antitumoral linamarasa/linamarasa/glucosa oxidasa«
- Título de la tesis: Estudio del mecanismo de muerte asociado a la terapia antitumoral linamarasa/linamarasa/glucosa oxidasa
- Autor: Ricardo Antonio Gargini
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 15/10/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Marta Izquierdo Rojo
- Tribunal
- Presidente del tribunal: abelardo López rivas
- pablo de Felipe fernandez (vocal)
- guillermo Velasco díez (vocal)
- Miguel Díaz hernández (vocal)