Tesis doctoral de Luis Martinez Gil
Los virus de plantas para extender la infección necesitan, en su movimiento célula-célula, atravesar la barrera que supone la pared celular, para lo cual aprovechan los plasmodésmos (pd). éstos son aperturas en la pared celular atravesadas por un canal membranoso (desmotúbulo) que permiten el intercambio de agua, nutrientes y moléculas de señalización. En el caso de los virus de rna de polaridad positiva la entrada en la planta provoca el desensamblaje de la cubierta proteica y el inicio de la transcripción de las proteínas virales implicadas en la replicación del genoma viral. A continuación se sintetizan el resto de proteínas del virus entre ellas las encargadas de transportar el rna viral de una célula a la célula adyacente, conocidas como proteínas de movimiento (mp). Estas proteínas son imprescindibles para el transporte del genoma del virus, en un primer lugar al pd (empleando la red de membranas del retículo endoplasmático (er)) y a continuación a través de éstos, en este caso en intensa interacción con el desmotúbulo. Los virus de plantas se agrupan en tres grandes categorías según el número de mp que presenten, así encontramos aquellos que presentan una única mp de gran tamaño, la superfamilia 30k, otro gran grupo conocido como dgb (double gene block) con dos pequeñas mp y por último el tgb (triple gene block) con tres mp. La interacción entre las membranas de la planta y las mp es imprescindible para el transporte del genoma viral pero únicamente ha sido estudiada en profundidad en el caso del tgb. Es por esto que en la presente tesis se planteó el estudio del tipo de interacción establecida entre las membranas y las mp del los virus mnsv y tcv ambos del dgb y pnrsv y tmv de la superfamilia 30k. Para lo cual se emplearon métodos bioquímicos de transcripción y traducción in vitro en presencia de microsomas y diferentes técnicas biofísicas así como ensayos in vivo tanto en e.Coli como en n.Bentamiana. El mnsv tiene dos mp, una soluble y capaz de unir rna (p7a), la otra p7b presenta una región hidrofóbica entre los aminoácidos 13 y 32 predicha por todos los programas empleados como un fragmento transmembrana (ftm). Dicha región es capaz de insertarse eficientemente en membranas derivadas del er. Es además capaz de dirigir e insertar la proteína en la membrana de manera cotraduccional. P7b adopta tanto en membranas del er como en e.Coli una topología n-t cit/c-t extracel. La mp p9 del tcv es al igual que p7b insertada de manera cotraduccional en membranas del er, donde adopta una topología n-t cit/c-t luminal determinada por su único ftm (aa 3-20).La mp del pnrsv, p30 presenta una región hidrofóbica incapaz de insertarse en la membrana. La proteína si se asocia a las membranas aunque de manera periférica no de manera integral. Su dominio hidrofóbico (aa 89-110) es probablemente responsable de esta interacción y juega un papel fundamental en la capacidad de la proteína para transportar el rna viral de una célula a otra. La prolina 96 (en la región hidrofóbica) además de determinar la estructura de este dominio es imprescindible para la correcta función de la proteína. La mp del tmv p30, modelo de estudio dentro de las mp, ha sido considerada hasta la fecha como una proteína integral de membrana. Los estudios realizados en esta tesis demuestran que si bien sí se asocia a la bicapa lipídica no lo hace de manera integral sino más bien periféricamente, igual que p32.
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio estructural y funcional de proteínas de movimiento viral de virus de plantas«
- Título de la tesis: Estudio estructural y funcional de proteínas de movimiento viral de virus de plantas
- Autor: Luis Martinez Gil
- Universidad: Universitat de valéncia (estudi general)
- Fecha de lectura de la tesis: 13/02/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ismael Mingarro Muñoz
- Tribunal
- Presidente del tribunal: vicente Rubio zamora
- Antonio vicente Ferrer montiel (vocal)
- José Luis Nieva escadón (vocal)
- Juan Antonio Garcia alvarez (vocal)