Tesis doctoral de Marta Puigmulé Raurich
La csa es un potente inmunosupressor ampliamente utilizado en el trasplante de órganos sólidos que como principal efecto secundario muestra una elevada toxicidad renal que puede conducir a la pérdida de la función renal. Los mecanismos moleculares a través de los cuales la csa ejerce su efecto inmunosupresor son bien conocidos. Aunque es sabido que el daño renal presenta dos formas de nefrotoxicidad claramente diferenciadas la nefrotoxicidad crónica y la aguda se conoce muy poco sobre los mecanismos de acción a nivel molecular implicados en el daño renal causado por el fármaco inmunosupresor csa. Estudios en nuestro laboratorio, mediante técnicas de doble híbrido en levadura, demuestran que la proteína kap (proteína específica de túbulo proximal) interacciona con el receptor intracelular de la csa, la ciclofilina b. La proteína kap disminuye en ratones tratados con csa y su expresión controlada en un sistema celular de túbulo proximal renal, las células pct3, reduce de forma significativamente la toxicidad producida por la csa. Por todos estos motivos, se abre un nuevo proyecto basado en determinar y estudiar los mecanismos moleculares implicados en la toxicidad celular causada por la csa en el túbulo proximal renal. los resultados obtenidos durante este trabajo experimental nos muestran cómo en las líneas celulares pct3 y hk-2, después de 24h de tratamiento con la dosis 10 ¿m csa se produce una reducción significativa de la viabilidad celular. Dosis inferiores de csa causan una disminución de la actividad deshidrogenasa mitocondrial al poco tiempo de haber iniciado el tratamiento, recuperándola poco después en todos los casos estudiados. A esta dosis y tiempo de tratamiento la disminución de la viabilidad coincide con la aparición de la muerte celular por apoptosis, una disminución del porcentaje de células en fase s y una disminución del consumo de oxígeno. a continuación se realiza una análisis proteómico diferencial de mapas proteicos obtenidos de células pct3 tratadas con dosis crecientes de csa durante 24h. La variación de la expresión de la mayoría de las proteínas analizadas tiene lugar a partir de la dosis 10 ¿m de csa. Es por este motivo que a continuación se realiza un análisis proteómico diferencial de células pct3 control con células pct3 tratadas durante 24h con 10 ¿m de csa. Este análisis detecta 72 proteínas diferenciales de las cuales se identifican 38. Estas proteínas se clasifican en 6 categorías diferentes: metabolismo de proteínas, metabolismo energético, ciclo celular, organización celular y citoesqueleto, daño celular y metabolismo de ácidos nucleicos. Para corroborar el análisis proteómico el comportamiento de algunas de estas proteínas fue comprobado mediante western blot de geles precedientes de electroforesis uni y bidimensionales. Este análisis nos ha permitido encontrar marcadores putativos de daño renal causado por la csa en el túbulo proxial renal. En este estudio proteómico también se ha estudiado cómo son de parecidos los proteomas de ratón y humano. finalmente, se han silenciado la expresión de la ciclofilinas a y b, receptores del fármaco csa, mediante rnai en las células pct3. A continuación se ha estudiado la sensibilidad de estas células a la csa y las proteínas y/o mecanismos moleculares implicados en el silenciamiento de las ciclofilina a y b. Los resultados nos muestran cómo las células con la expresión de la cypa o b disminuida son menos sensibles a la toxicidad celular causada por la csa, ya que ésta empieza a manifestarse a la dosis de 20 ¿m de csa. La apoptosis sin embargo aparece a las mismas concentraciones que lo hace en las células pct3 sin interferir. Sin embargo los niveles de apoptosis detectados en las células con la expresión de la cypa o cypb disminuida es inferior que la apoptosis encontrada en las células control. Este hecho es más evidente cuando se silencia la cypa. A continuación se realiza un análisis proteómico diferencial entre células pct3 control y pct3 interferidas con una u otra ciclofilina. Para la cypa se encuentran 49 proteínas diferencialmente expresadas de las cuales se han identificado 25. Para la cypb se detectan 68 proteínas diferencialmente expresadas 21 de las cuales ha sido identificadas. De todas estas proteínas identificada hasta el momento las podemos clasificar en 3 grupos: i) proteínas que son comunes al interferir las cilofilinas y al tratamiento con csa 10 ¿m, ii) proteínas comunes al interferir una u otra cilofilina y iii) proteínas exclusivas de una u otra interferencia.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización de los sistemas renales de ratón yi humano (pct3 i hk-2). mecanismos moleculares implicados en la nefrotoxicidad producida por la csa en el túbulo proximal renal«
- Título de la tesis: Caracterización de los sistemas renales de ratón yi humano (pct3 i hk-2). mecanismos moleculares implicados en la nefrotoxicidad producida por la csa en el túbulo proximal renal
- Autor: Marta Puigmulé Raurich
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 29/05/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Anna Messeguer Navarro
- Tribunal
- Presidente del tribunal: emili Itarte fresquet
- carles j. Ciudad (vocal)
- francesc Canals surís (vocal)
- Alberto Tejedor Jorge (vocal)