Tesis doctoral de Estrella Guarino Almeida
En escherichia coli, la reducción de los ribonucleótidos utilizados en la síntesis de dan a sus de soxiribonucleótidos (dntps) correspondientes se lleva a cabo por la ribonucleótido difosfato reductasas (ndpreductasa) que es esencial para la replicación del cromosoma. La mutación nrda101 da lugar a una ndpreductasa termosensible. La incubación a 42ºc de extractos crudos o preparaciones puras de la enzima mutante destruye su actividad en dos minutos; sin embargo, al incubar a 42ºc una bacteria mutante termosensible nrda101, no se detiene la replicación hasta transcurridos 40-50 minutos después del cambio de temperatura. Esto sugiere que la ndp reductasa mutada podría estar protegida de la inactivación térmica por alguna hiperestructura, ya que el fenotipo de esta estirpe no es el característico de un mutante de elongación. en este trabajo se ha analizado la progresión de las horquillas de reclinación en una estirpe nrda101, observándose que en este mutante las horquillas de replicación sufren más paradas que en una estirpe isogénica silvestre para el elelo nrda. Además, este aumento de horquillas paradas no se debe a un menor suministro de nucleótidos generado por un actividad parcial de la enzima mutada incluso a temperatura permisiva y las horquillas detenidas se reanudan mediante reversiones (siguiendo el modelo del rfr), al igual que ocurre al detener la replicación alterando enzimas que forman parte del replisoma. También se ha demostrado que la síntesis residual de dna que se produce al incubar el mutante a 42ºc procede sin necesidad de la acción de enzimas de recriminación ni de la proteína pria, señalando que durante el tiempo que la ndp reductasa permanece protegida no se produce un desensamblaje de la maquinaria de replicación. Se detectó también que la capacidad de sufrir una reversión de las horquillas paradas en el mutante nrda101 variada dependiendo de la estrategia empleada para inactivar la ndp reductasa -i
Datos académicos de la tesis doctoral «Implicaciones de la ndp reductasa en la progresión de las horquillas de replicación en escherichia coli«
- Título de la tesis: Implicaciones de la ndp reductasa en la progresión de las horquillas de replicación en escherichia coli
- Autor: Estrella Guarino Almeida
- Universidad: Extremadura
- Fecha de lectura de la tesis: 21/06/2006
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Alfonso Jiménez Sánchez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: josep Casadesus pursals
- Ana María Mata durán (vocal)
- José Emilio Rebollo feria (vocal)
- Jaime Correa bordes (vocal)