Tesis doctoral de Mireia Abel Lluch
Las glicosidasas que hidrolizan substratos con retención de configuración siguen un mecanismo general en que después de una primera etapa de asociación enzima-ligando se encadenan dos etapas catalíticas que llevan a la hidrólisis del substrato conservando la configuración del carbono anomérico en el nuevo extremo generado. en el presente trabajo se comprueba a través de estudios mecanísticos, principalmente estudios en estado pre-estacionario y análisis de hammett, que con este mecanismo tan sencillo no se puede describir correctamente la actividad catalítica de la 1,3-1,4-íY-glucanasa de bacillus licheniformis, y se propone el mecanismo que se muestra a continuación: donde los complejos enzima-substrato adoptan dos conformaciones productivas (ses* y ses**) y donde el balance entre estas dos conformaciones en función del substrato explica los diferentes comportamientos cinéticos en estado estacionario y pre-estacionario. un estudio en profundidad sobre la importancia que ejerce la interacción entre el enzima y el hidroxilo en c2 de la unidad de glucopiranosa que ocupa el subsitio -1 demuestra que en el caso de la 1,3-1,4-íY-glucanasa de bacillus licheniformis esta interacción no juega el papel relevante que se ha observado en otras íY-glicosidasas que actuan con retención de configuración. el estudio de la reacción de hidratación del glical g4g3g catalizada por la 1,3-1,4-íY-glucanasa de bacillus licheniformis permite proponer que hay un cambio en el residu que ejerce el papel de ácido general. De manera que se propone que el asp136 que en la reacción de hidrólisis de substratos ayuda en el posicionamiento de los resíduos catalíticos y juega un papel en la regulación de sus pka, es el resíduo que actúa de ácido general en la reacción de hidratación de glicales.
Datos académicos de la tesis doctoral «Mecanisme enzimÁ tic de la 1,3-1,4-¿-glucanasa de bacillus licheniformis: estudis cinétics en estat estacionari i preestacionari«
- Título de la tesis: Mecanisme enzimÁ tic de la 1,3-1,4-¿-glucanasa de bacillus licheniformis: estudis cinétics en estat estacionari i preestacionari
- Autor: Mireia Abel Lluch
- Universidad: Ramón llull
- Fecha de lectura de la tesis: 22/01/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Antonio Planas Sauter
- Tribunal
- Presidente del tribunal: carme Brosa ballesteros
- joan carles Ferrer artigas (vocal)
- María Vilanova brugués (vocal)
- carme Rovira virgili (vocal)