Tesis doctoral de LLuis Martorell Cedres
Esta tesis doctoral describe el papel del receptor nuclear nor-1(neuron-derived orphan receptor-1) en la activación de células endoteliales por estímulos pro-angiogénicos. antecedentes: nor-1 se identificó como un factor de transcripción diferencialmente expresado por estímulos mitogénicos en cml in vitro. éste receptor nuclear huérfano, que juntamente con nur77 y nurr1 forma parte de la familia nr4a, se encontraba sobre-expresado en placas arterioscleróticas humanas y en un modelo animal de angioplastía, donde se veía involucrado en la proliferación de las células vasculares. objetivo: el objetivo de este trabajo fue analizar el papel de nor-1 en la activación de células endoteliales por trombita, así como el papel de este factor de transcripción en la adaptación de estas células a la hipoxia. resultados: la trombita provocó la sobre-expresión temprana de nor-1 en células endoteliales huvec a través del receptor de la trombita par-1. Este efecto dependía de múltiples vías de señalización(movilización de calcio intracelular, activación de la vía pkc y de las vías mpak p38 y erk) y de la activación corriente a bajo de la proteína, creb. El papel crítico de creb se estableció mediante el uso de un dominante negativo y por mutagenesis dirigida sobre los elementos de respuesta a amp cíclico (cre) presentes en el promotor de nor-1. Además, el bloqueo del receptor de par-1, abolió la activación de creb, la sobre-expresión de nor-1 y la síntesis de novo de dna (índice de proliferación celular) inducida por trombina. El péptido agonista del receptor de trombina, trap-6, reprodujo este efecto, mientras que el inhibidor irreversible de la trombina, ppack, lo bloqueó. Finalmente, se mostró que la expresión de nor-1 modula la proliferación y migración de las células endoteliales en un modelo in vitro de reparación de herida. un segundo grupo de resultados mostró que la hipoxia provoca la sobre-expresión nor-1 de forma dosis y tiempo dependiente, según un mecanismo que dependía de la movilización de calcio intracelular y de la activación de la vía pi3k/akt, pero no de la vía pkc ni de las vías p38 mapk ni erk 1/2. Además la secreción autocrina de vegf, inducida en ce por hipoxia, no estaba implicada en la modulación de nor-1 por este estímulo, como mostró el uso de anticuerpos de bloqueo contra vegf o de un inhibidor específico de su receptor. Paralelamente, la hipoxia no promovía la activación del factor de transcripción creb, observada en la modulación de nor-1 por otros estímulos mitogénicos. Este hecho sugería la no implicación de creb, hecho que se comprobó mediante el bloqueo de su expresión a partir de rna de interferencia. Por el contrario, la inhibición de hif-1a por rna de interferencia, disminuyó de forma significativa la modulación de nor-1 inducida por hipoxia. Por estudios de activación transcripcional se observó que la actividad del promotor de nor-1, aumentaba tanto por hipoxia como por co-transfección con el factor hif-1a. Posteriormente, se identificó un elemento de respuesta a hipoxia (hre) en el promotor de nor-1 responsable de la activación transcripcional, como se observó por delecciones seriadas o mutagenesis dirigida contra este elemento. Finalmente, se demostró que la expresión de nor-1 modulaba la supervivencia de las células endoteliales media por marcaje con anexina v. conclusiones: estos resultados indican que la sobre-expresión de nor-1 juega un papel clave en el crecimiento, migración y supervivencia de las células endoteliales. Así, nor-1 podrían ser una potencial diana terapéutica para prevenir los efectos vasculares desencadenados por la trombina e hipoxia en células endoteliales.
Datos académicos de la tesis doctoral «Nor-1 en la activacion de celulas endoteliales por estimulos pro-angiogenicos. regulacion por trombina e hipoxia«
- Título de la tesis: Nor-1 en la activacion de celulas endoteliales por estimulos pro-angiogenicos. regulacion por trombina e hipoxia
- Autor: LLuis Martorell Cedres
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 29/01/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Lina Badimon Maestro
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Marta Giralt oms
- José Antonio Rodriguez gracia (vocal)
- pablo García de frutos (vocal)
- pablo Fuentes- prior (vocal)