Tesis doctoral de Dolores Bellido Martin
El objeto de la presente tesis ha sido el estudio del papel de gas6 en la respuesta inmune innata, a través de su función en el endotelio de los vasos sanguíneos. para el desarrollo de los estudios in vivo, se utilizó un modelo murino de deficiencia en gas6, el knockout de gas6. Se utilizó un modelo de inflamación sistémica por inyección i.P. De lipopolisacárido, y un modelo de activación endotelial in vivo por microscopia intravital para estudiar el efecto de la deficiencia en gas6 en las interacciones entre leucocitos y plaquetas con el endotelio y la acción del lps en los ratones deficientes en gas6. Estos estudios demuestran que los ratones knockout de gas6 son más sensibles a la muerte inducida por shock séptico a distintas dosis. Sin embargo, el estado de activación de la cascada de coagulación de estos animales muestra que no es provocada por una coagulación intravascular diseminada más severa que en los animales silvestres, a la vez que la infiltración de células inflamatorias es menor a nivel de tejidos periféricos (hígado y pulmón). El análisis de la cascada de citoquinas inflamatorias resultó similar en ambos fenotipos, excepto il1beta cuyos niveles fueron de más del doble en los ratones knockout respecto los silvestres. utilizando un modelo de activación endotelial in vivo pudimos demostrar que las interacciones entre las células de la sangre marcadas, leucocitos y plaquetas, y el endotelio en los ratones gas6-/- eran menores que en los ratones silvestres en un mecanismo dependiente de p-selectina. En estos experimentos se utilizó a23187 (ionóforo de calcio) para activar el endotelio y ácido gálico (inhibidor de la interacción p-selectina con psgl-l) en los ensayos de inhibición. el estudio del endotelio gas6-/- se realizó mediante cultivos primarios de células endoteliales de pulmón. demostramos que el endotelio deficiente en gas6 es más sensible al ayuno de factores de crecimiento y suero y posee menor capacidad de reparar un daño mecánico en un modelo de daño in vitro. las células deficientes gas6 mostraron una falta de fosforilación de akt por estimulación con lps y un retardo en la activación de la vía mapk erk ¿, que no se tradujo en una menor activación del factor de transcripción nfkb ni en una menor expresión de genes de citoquinas inflamatorias y de moléculas de expresión. La estimulación con lps provoca una mayor activación de estos genes en ausencia de gas6, lo cual explicaría una mayor producción de il1 beta en ausencia de gas6 aunque no la menor infiltración de células inflamatorias al tejido. la estimulación con tnf indica que podría existir una ausencia diferente en las células endoteliales medida por la ausencia/presencia de gas6 por existir una ausencia de activación de nfkb y menor expresión de genes de citoquinas inflamatorias y de selectinas. La activación de la vía akt/p13k parece independiente de la estimulación con tnf aunque éste provoca la activación de mapk erk de forma similar en ambos genotipos. en nuestro modelo de deficiencia en gas6 la mayor sensibilidad al shock séptico de los ratones es atribuible a una mayor producción de il1beta que unido a un ineficiente aclaración de las células inflamatorias provoca una respuesta inflamatoria aumentada y consiguiente daño tisular. los ratones deficientes en gas6 no mostraron ninguna diferencia respecto a los silvestres en un modelo de inflamación local por pancreatitis aguda ni en un modelo de regeneración por hepatectomia parcial.
Datos académicos de la tesis doctoral «Papel de gas6 en la inflamacion. enfasis en la accion sobre el endotelio«
- Título de la tesis: Papel de gas6 en la inflamacion. enfasis en la accion sobre el endotelio
- Autor: Dolores Bellido Martin
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 14/12/2007
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Pablo García De Frutos
- Tribunal
- Presidente del tribunal: carme Caelles franch
- sebastia Pons fuxa (vocal)
- María isabel Diaz ricart (vocal)
- nuria Sala (vocal)