Tesis doctoral de Luis Vidal Conde
La utilización de aldolasas como biocatalizadores para la formación de enlaces c-c con estereoquímica definida depende esencialmente del descubrimiento de nuevas aldolaas y de la capacidad de disponerlas en el mercado para poder desmostrar su poder en la síntesis de sintones quirales el presente trabajo es una aportación al campo de las síntesis asimétricas basadas en el uso de enzimas a través de la clonación de nuevas aldolasas naturales, así como al desarrollo de procesos de obtención de aldolasas recombinantes dependientes de dhap, de glicina y de acetaldehído para su utilización en la síntesis de compuestos complejos con dos nuevos centros quirales de estereoquímica definida y complementaria. las enzimas objetivo de este trabajo son las cuatro aldolasas dependientes de dhap (ramnulosa 1-fosfato aldolasa, fuculosa 1-fosfato aldolasa, fructosa 1,6 bifosfato aldolasa, tagatosa 1,6 bifosfato aldolasa), dos aldolasas dependientes de glicina (treonina aldolasas) y aldolasas dependientes de acetaldehído (desoxiribosa 1-fosfato aldolasa). En concreto, este trabajo se resume en cinco puntos básicos: primero, se han clonado siete aldolasas procariotas de diversas fuentes microbianas, principalmente de e. Coli, en una plataforma homogénea, sencilla y versátil que permite la sobreexpresión soluble intracelular de estas enzimas como proteínas de fusión a una cola de histidinas. segundo, se ha desarrollado una estrategia general de purificación que permite obtener el producto funcional en un mínimo número de etapas con un alto rendimiento y estabilidad. tercero, se han puesto a punto las metodologías necesarias para la determinación de las actividades aldolásicas específicas en base a ensayos enzimáticos espectrofotométricos fundamentados en la reacción con el sustrato natural de cada una. cuarto, se ha seleccionado el sistema de producción de ramnulosa 1-fosfato aldolasa (rhua) como modelo para definir un proceso reproducible a escal
Datos académicos de la tesis doctoral «Producción de aldolasas recombinantes: de la biología molecular al desarrollo de procesos«
- Título de la tesis: Producción de aldolasas recombinantes: de la biología molecular al desarrollo de procesos
- Autor: Luis Vidal Conde
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 20/03/2006
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Glória Caminal Soperas
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Villaverde
- pere Clapés (vocal)
- eduardo García-junceda (vocal)
- toni Planas (vocal)
