Tesis doctoral de Eva Lambea Martínez
Las células eucariotas de levadura, al igual que sus homólogas en organismos superiores, responden a situaciones de estrés extracelular activando las vías de map quinasas, las cuales son las responsables de transmitir la señal mediante la activación de la expresión génica necesaria para mantener la homeostasis celular. Evidencias experimentales recientes indican que la quinasa srk1, identificada en nuestro grupo, participa tanto en la respuesta a estrés celular como en la regulación de la progresión del ciclo celular (lópez-avilés s et al., Mol cell, 2005). Referente al papel de la srk1 en el ciclo celular, se ha descrito que actúa inhibiendo la transición g2/m mediante la fosforilación inhibidora de la fosfatasa cdc25, promoviendo su unión a una proteína 14-3-3 (rad24 en s. Pombe) y su posterior exclusión del núcleo. Por otro lado, estudios paralelos llevados a cabo por el grupo de la dra. Quinn, han descrito que la srk1 se induce y fosforila de forma dependiente de la mapk sty1 en respuesta a estrés. Estos últimos resultados nos han llevado a realizar los experimentos que constituyen esta tesis doctoral. La primera parte del trabajo se ha centrado en describir la regulación de srk1 en respuesta a estrés por la mapk sty1 y elucidar el papel de la srk1 en la respuesta a dicho estrés. Así hemos demostrado que en respuesta a estrés srk1 se fosforila y activa en la t463 por la mapk sty1. Dicha fosforilación promueve la separación de sty1 y srk1 (que en condiciones normales se encuentran unidas e inactivas en el citoplasma) y permite que srk1 inactive de forma transitoria el ciclo celular a través de la fosforilación inhibidora sobre cdc25. La fosforilación inhibidora sobre cdc25 promueve la unión de la fosfatasa y la proteína rad24 con la que se exporta al citoplasma donde queda estabilizada. Sty1, a su vez, activa la transcripción de genes necesarios para la respuesta a estrés. Srk1, fosforilada por sty1 es inestable y se degrada vía proteasoma. Todos estos resultados han sido publicados en el siguiente artículo: lópez-avilés s*, lambea e*, moldón a, grande m, fajardo a, rodríguez-gabriel ma, hidalgo e, aligue r (2008) activation of srk1 by the mitogen-activated protein kinase sty1/spc1 precedes its dissociation from the kinase and signals its degradation. Mol biol cell, 19, 1670-1679. en la segunda parte del trabajo, nos hemos centrado en describir el significado biológico de que la mapk sty1 por un lado induzca la expresión de srk1 en respuesta a estrés y por el otro, la desestabilice una vez activada. Los experimentos llevados a cabo nos han permitido observar que la proteína srk1 sintetizada de novo en respuesta a estrés parece tener un papel en el silenciamiento de la vía de mapks. De la misma manera que la vía de mapks de respuesta a estrés se activa mediante una cascada de fosforilaciones secuenciales, es de vital importancia que una vez la fuente de estrés desaparezca o la célula se adapte a ella, dichas fosforilaciones sean revertidas mediante la acción de fosfatasas específicas para evitar la toxicidad producida por una hiperactivación de la vía. Así en células delecionadas para srk1, hemos observado que la mapk sty1 se mantiene fosforilada y activa durante periodos de tiempo mucho mayores que en células salvajes. Los resultados indican que presumiblemente, srk1 actúa a través de la mapkk wis1 (la responsable de activar sty1 en respuesta a estrés). De hecho, la secuenciación de fosfopéptidos ha revelado que srk1 fosforila la t225 de wis1, impidiendo así la unión entre wis1 y sty1, y permitiendo la defosforilación e inactivación de la mapk sty1 por las fosfatasas pyp1 y pyp2, evitando que wis1 vuelva a activarla.
Datos académicos de la tesis doctoral «Activació i regulació de la quinasa srk1 en resposta a estrés en schizosaccaromyces pombe«
- Título de la tesis: Activació i regulació de la quinasa srk1 en resposta a estrés en schizosaccaromyces pombe
- Autor: Eva Lambea Martínez
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 15/05/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Rosa Aligue Alemany
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ferran Azorin marin
- francesc Posas garriga (vocal)
- (vocal)
- (vocal)