Tesis doctoral de Verónica Veses Jiménez
Mediante el inmunorrastreo de una genoteca de expresión de candida albicans con un anticuerpo policlonal específico de la forma micelial de dicho hongo (pab anti-gt), se ha aislado, clonado y caracterizado un nuevo gen de este microorganismo. Dicho gen está contenido en el contig 5-3205 del proyecto de secuenciación del genoma de c. Albicans, y contiene un marco abierto de lectura que codifica para un polipéptido putativo de 288 aminoácidos, con un peso molecular aproximado de 32.921 da. La represión del gen aislado ocasionó un severo defecto en la morfogénesis de c. Albicans, caracterizado por la formación de cadenas de levaduras, por lo que el gen fue denominado abg1 (del inglés, «altered budding growth»), en base al fenotipo de crecimiento por gemación alterado observado en las cepas mutantes para dicho gen. Ensayos de inmunotransferencia de fracciones subcelulares con un anticuerpo policlonal frente a abg1p, y estudios de fusión con la proteína verde fluorescente (gfp) de aequorea victoria, revelaron que abg1p se localizaba en la membrana vacuolar de c. Albicans. El patrón de fluorescencia de la proteína abg1p-gfp colocalizó con el observado tras tinción con fm4-64, agente que tiñe la membrana vacuolar y de vesículas endocíticas. Con la finalidad de establecer el papel de abg1 en la biología de c. Albicans se procedió a la construcción de un mutante nulo, que no pudo llevarse a cabo a pesar de utilizar dos técnicas de interrupción génica distintas. Se procedió a la construcción de un mutante condicional, en el que la primera copia de abg1 estaba interrumpida con el cassette ura-blaster y la segunda copia quedaba situada bajo el control del promotor de met3. Al reprimir la expresión de abg1, por la acción represora de la metionina y cisteína sobre el promotor de met3, el mutante fue incapaz de crecer, lo que estableció el carácter esencial de abg1 para c. Albicans. El análisis fenotípico del mutant
Datos académicos de la tesis doctoral «Aislamiento y caracterización de abg1, un gen esencial del hongo patógeno oportunista candida albicans.«
- Título de la tesis: Aislamiento y caracterización de abg1, un gen esencial del hongo patógeno oportunista candida albicans.
- Autor: Verónica Veses Jiménez
- Universidad: Universitat de valéncia (estudi general)
- Fecha de lectura de la tesis: 14/07/2005
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- José Pedro Martinez Garcia
- Tribunal
- Presidente del tribunal: rafael Sentandreu ramon
- guillermo Quindós andrés (vocal)
- ángel Domínguez olavarri (vocal)
- a.r. Gow neil (vocal)