Tesis doctoral de José Luis Nájera García
El sistema 2-5a/rnasa l está formado por las enzimas 2¿5¿oligoadenilato sintetasa (2¿-5¿oas) y rnasa l implicadas en llevar a cabo las acciones antivirales del interferón. La enzima 2¿-5¿oas se activa tras las infecciones virales por el rna bicatenario (dsrna) y produce los 2¿5¿ oligoadenilatos, (p3(a2¿p5¿)2a, que se unen a rnasa l activándola. Rnasa l es la enzima efectora que desempeña la acción nucleasa del sistema 2-5a degradando tanto rnas ribosomales como virales y celulares, lo que resulta en una inhibición de la síntesis de proteínas y en apoptosis. La activación de rnasa l también induce apoptosis. Para obtenter mas información sobre el mecanismo molecular por el cual rnasa l induce apoptosis, hemos expresado las enzimas rnasal y 2¿-5¿oas en células humanas hela usando vectores vaccinia recombinantes y hemos analizado en detalle distintos marcadores bioquímicos de apoptosis y su relación con la degradación del rrna. Se han realizado experimentos de microarrays tras la activación del sistema 2-5a/rnasa l, para analizar la expresión de genes celulares específicos. Nuestros resultados muestran evidencia de la implicación de distintas caspasas (2,8 y 9) en la apoptosis inducida por el sistema 2-5a/rnasa l, en concreto, hemos definido su papel en la ruta intrínsica o mitocondrial. El sistema 2-5a/rnasa l induce la salida del citocromo c de la mitocondria al citosol de una manera dependiente de la activación de las caspasas. El desarrollo de apoptosis produce la ruptura del potencial mitocondrial y la generación de especies reactivas de oxígeno (ros), ambos procesos son dependientes de caspasas. La activación de rnasa l induce alteraciones morfológicas en la mitocondria, y proteinas mitocondriales implicadas en apoptosis juegan un papel en este proceso. La proteína antiapoptótica bcl2 es capaz de bloquear la apoptosis inducida por el sistema 2-5a/rnasa l e impide tambien la disminución del potencial mitocondrial. Ambas enzimas rnasa l y 2¿-5¿oas se localizan principalmente en las fracciones mitocondriales durante el desarrollo de apoptosis. Los resultados presentados en esta tesis doctoral demuestran que la activación de la enzima rnasa l produce la degradación del rrna, lo cual es previo y necesario para la inducción de apoptosis. Además, la activación de rnasa l produce la degradación del rrna mitocondrial 16s, lo cual confirma la localización del sistema 2-5a/rnasa l en este orgánulo y nos muestra una nueva función de rnasa l en el metabolismo del rna mitocondrial. Los análisis de microarrays han indentificado una serie de genes cuya expresión está significactivamente aumentada o disminuida por acción de la expresión del sistema 2-5a/rnasa l. Resumiendo, nuestros datos demuestran el significado biológico del sistema 2-5a/rnasa l en la inducción de apoptosis a través de la ruta mitocondrial y definen los mecanismos moleculares implicados.
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización «in vivo» de los vectores atenuados de poxvirus mva y nyvac como candidatos vacunales frente al vih/sida«
- Título de la tesis: Caracterización «in vivo» de los vectores atenuados de poxvirus mva y nyvac como candidatos vacunales frente al vih/sida
- Autor: José Luis Nájera García
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 23/11/2008
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- María no Esteban Rodriguez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: m. angeles Muñoz fernandez
- Antonio Alcami (vocal)
- José Antonio Melero fondevilla (vocal)
- Juan Ortin monton (vocal)