Tesis doctoral de Joaquin Castilla Castrillon
1. Se ha determinado la secuencia de los genes de las cadenas ligera y pesada del anticuerpo 6a.C3 neutralizante para el vgpt, concluyendo que el modulo variable de la cadena ligera kappa pertenece al subgrupo v y el modulo variable de la cadena pesada gamma pertenece al subgrupo iiic, segun la clasificacion de kabat. 2. Se ha construido un anticuerpo recombinante quimerico murino-humano con especificidad para el vgpt. Este anticuerpo se ha secretado de forma transitoria en celulas epiteliales cos y de forma estable en celulas sp2/0, obteniendose titulos en ria de 10 elevado a 3 que reducen la infectividad del virus en un factor superior a 10.000, comparables a los del anticuerpo 6a.C3 original. 3. Se ha demostrado la proteccion de cultivos celulares frente a infecciones virales mediante la expresion de anticuerpos recombinantes. La produccion de virus en estas lineas celulares disminuyo 100.000 veces. Este trabajo se podria utilizar para el desarrollo de sistemas de terapia genica somatica basados en la expresion de anticuerpos. 4. Se ha desarrollado un sistema que permite la expresion inducible de genes de inmunoglobulina en cultivos celulares de glandula mamaria de raton, utilizando modulos de expresion especificos de tejido, para comprobar la funcionalidad de estas construcciones antes de utilizarlas en la obtencion de animales transgenicos. 5. Se han obtenido animales transgenicos que secretan entre 1-20 mg/ml de racms en la leche durante la lactancia. Los titulos de anticuerpos obtenidos redujeron la infectividad del vgpt en un factor superior a 10 elevado a 6, lo que probablemente permita proteger a la descendencia frente a la infeccion por coronavirus. 6. Se ha demostrado que la cointegracion de modulos de expresion de genes de inmunoglobulinas con secuencias de anclaje a la matriz nuclear (secuencias mar) aumento 1000 veces los niveles de expresion de los anticuerpos secretados en la leche de ratones transgenic
Datos académicos de la tesis doctoral «Construccion de animales transgenicos secretores de anticuerpos neutralizantes para coronavirus.«
- Título de la tesis: Construccion de animales transgenicos secretores de anticuerpos neutralizantes para coronavirus.
- Autor: Joaquin Castilla Castrillon
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1997
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Luis EnJuan es Sanchez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jose Fernandez Piqueras
- Antonio Bernar Miana (vocal)
- José Antonio Melero Fondevilla (vocal)
- Francisco Parra Fernandez (vocal)