Tesis doctoral de Elisenda Viaplana Florensa
La presente tesis se basa en la expresión en e. Coli del gen estructural vp60, y en el análisis de las principales regiones antigénicas y inmunogénicas de la proteína de cápside del aislado de campo de rhdv, mc-89. La secuencia del gen vp60 presentó una heterogeneidad muy constante entre aislados co-circulantes (1-4,8%). Secuencias de virus más alejados como el ebhsv o el rcv permitieron identificar una región con un nivel significativo de divergencia (3,45-44,4%). La producción en e. Coli de vp60 fusionada al ct de la beta-galactosidasa dió lugar a proteínas de fusión que fueron rápida y eficientemente proteolizadas por una diana tipo tripsina (r611-t612) presente en la beta-galactosidasa. La influencia del dominio heterólogo sobre el plegamiento de la beta-galactosidasa era reversible. El gen vp60 se subclonó en cinco segmentos solapantes (aas 1667-1816, 1792-1940, 1924-2067, 2045-2198 y 2182-2344) y se expresó en el vector pet-22b(+). En las proteínas recombinantes derivadas, la presencia de un péptido no hibrofóbico codificado por secuencias del mcs promovía la muerte celular y bajos niveles de acumulación de proteína recombinante. La producción del segmento ct de la vp60 en dos vectores de la serie pet, reveló que la versión citoplasmática se producía en grandes cantidades, mientras que a presencia de un péptido señal en la versión periplasmática de esta proteína generaba una disminución drástica del crecimiento y muerte celular. En el estudio de antigenicidad (mediante western blot) de los segmentos recombinantes de vp60 se utilizaron sueros de animales vacunados e infectados con rhdv. Los resultados demostraron que, mientras el nt (158 primeros aas) estaba formado por determinantes antigénicos con epítopos b continuos, el ct estaba compuesto por epítopos b dependientes de conformación. Así mismo, una parte importante de los epítopos presentes en los 158 primeros aas y en la región 30
Datos académicos de la tesis doctoral «Produccion en escherichia coli de la proteina estructural vp60 del virus de la enfermedad hemorragica del conejo. caracterizacion antigenica e inmunogenica.«
- Título de la tesis: Produccion en escherichia coli de la proteina estructural vp60 del virus de la enfermedad hemorragica del conejo. caracterizacion antigenica e inmunogenica.
- Autor: Elisenda Viaplana Florensa
- Universidad: Autónoma de barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1998
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Antonio Villaverde Corrales
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Jordi Barbe
- Carlos Saiz Juan (vocal)
- Marc Ribo (vocal)
- Guadalupe Ercilla (vocal)