Tesis doctoral de Gost Garde José Ignacio
Hemos desarrollado un anticuerpo monocional que marca astrocitos en tejido humano, de mono y de rata. utilizamos como inmunogeno, tejido de hipocampo extraido de un cerebro humano poco despues de su muerte. El examen neuropatologico del cerebro revelo una angiopatia congofilica. El tejido fue congelado hasta su homogeneizacion e inmunizacion por inyeccion del tejido en ratones de la cepa balb/c. Se utilizaron protocolos estandarizados para la fusion de los linfocitos del bazo del raton con las celulas de mieloma, obteniendose hibridomas cuyos sobrenadantes fueron probados mediante test elisa. El anticuerpo monoclonal obtenido es una igm, y reconoce una proteina de 43.000 daltons, determinada esta mediante westernblot. Las pruebas inmunohistoquimicas se realizaron en tejido nervioso humano fijado con paraformaldehido al 4% mediante perfusion intracarotidea, y seccionado con un microtomo de congelacion a 30 o 50 um. El tejido de mono utilizo el mismo protocolo de perfusion, mientras que el tejido de rata dio mejores resultados cuando se fijo con una mezcla de paraformaldehido al 1% mas glutaraldehido al 1,25%. La dilucion optima del anticuerpo se titulo en 1/50-1/100. el anticuerpo se incubo con el tejido durante 48 h a 4, se proceso con un kit avidina-biotina (vector), y se reacciono con dab e hidrogeno peroxido. Las secciones se montaron y se intensificaron con osmiotiocarbohidrazida. en todas las especies probadas, los astrocitos se marcaron intensamente, incluso en sus prolongaciones mas finas, tanto en la sustancia blanca como en la sustancia gris. El anticuerpo parece ser efectivo no ya solo en tejido nervioso humano control, sino tambien en tejidos patologicos (tejido con enfermedad de alzheimer, y en tumores de origen astrocitario, como por ejemplo en el glioblastoma multiforme). Su comparacion con un anticuerpo comercial anti-gfap resulta en un marcaje similar, aunque nuestro anticuerpo da un marcaje global ligerament
Datos académicos de la tesis doctoral «Produccion y caracterizacion de anticuerpos monoclonales contra elementos formes de la formacion hipocampica en el hombre«
- Título de la tesis: Produccion y caracterizacion de anticuerpos monoclonales contra elementos formes de la formacion hipocampica en el hombre
- Autor: Gost Garde José Ignacio
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1991
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Ricardo Insausti Serrano
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Gonzalo Sanz Luis María
- Bernardo Castellanos (vocal)
- Manuel Nieto Sampedro (vocal)
- José María Martinez-peñuela Virseda (vocal)