Tesis doctoral de M. Elena Miranda Baños
El órgano subcomisural(osc) es una glándula del cerebro de todos los vertebrados, localizada en el techo del tercer ventrículo, cuyas células secretan glucoproteínas de alto peso molecular al líquido cefalorraquídeo, donde polimerizan y forman la fibra de reissner(fr),que atraviesa el acueducto cerebral, el cuarto ventrículo y el canal central de la médula espinal. Hasta este trabajo de tesis doctoral, se disponía de anticuerpos monoclonales anti-fr, con los cuales se desarrolló un elisa sandwich para la detección y cuantificación de la secreción del osc. como primer objetivo de esta tesis doctoral, se ha puesto a punto un protocolo de purificación por cromatografía de inmunoafinidad con dos de los anticuperos monoclonales anti-fr, con el que se ha logrado purificar casi a homogeneidad la secreción intracelular del osc de vaca. Las tres bandas purificadas, indentificadas en electroforesis y anteriormente descritas en la bibliografía como de 540,450 y 320 kda, sehan utilizado conjuntamente como antígeno para la generación de un nuevo grupo de anticuerpos monoclonales anti-osc, así,se han establecido quince líneas de hibridomas productoras de quince anticuerpos monoclonales, que se han caracterizado por inmunocitoquímica, varios tipos de elisa e immunoblot. En inmunocitoquímica, todos los anticuerpos monoclonales reconocen el osc y la fr de vaca, y la mayoría de ellos reaccionan con el osc de conejo y cerdo; por primera vez, se han obtenido además dos anticuerpos que reconocen con intensidad el osc de rata y de ratón. La caracterización por elisa ha mostrado que los anticuerpos monoclonales generados reconocen con alta afinidad las glucoproteínas del osc y la fr(elisa mediado por antígeno), reaccionando con epitopos diferentes entre sí(elisa competitivo), que no se repiten y que coexisten(elisa sandwich) en las glucoproteínas de secreción. En immunoblot de extractos de osc de vaca, cinco de los anticuerpos a
Datos académicos de la tesis doctoral «Purificacion y analisis de la secrecion del organo subcomisural de vaca(bos taurus)con anticuerpos monoclonales«
- Título de la tesis: Purificacion y analisis de la secrecion del organo subcomisural de vaca(bos taurus)con anticuerpos monoclonales
- Autor: M. Elena Miranda Baños
- Universidad: Málaga
- Fecha de lectura de la tesis: 19/01/2001
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Juan Perez Rodriguez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Fernandez llebrez y del rey pedro
- Del brio leon Mª de los angeles (vocal)
- alfredo Rodriguez tebar (vocal)
- isabel De diego barbado (vocal)