Tesis doctoral de Martin Hernandez M. Paz
La congelaci]on de precursores hemopoyéticos mediante introducci]on directa en congelador a -80c y utilizaci]on de hes como criopreservante consigue tasas de enfriamiento de 1c/min si se utilizan volúmenes de muestra mayores de 100 ml. El volumen de la suspensi]on celular obtenida tras selecci]on positiva es menor de 5-10 ml. Ante estos volúmenes la congelaci]on no programada es de inaceptable riesgo. hipotesis la inmersi]on de estos hemoderivados con medios de criopreservaci]on libres de hes, en 3 l de metanol homogeneizará la velocidad de enfriamiento (ve) a 1 grado c/min permitiendo la realizaci]on de transplantes hemopoyéticos en condiciones seguras. material y metodos tras obtenci]on de las células mediante aféresis de sangre periférica, se purificaron mediante selecci]on positiva con el método de inmunoadsorci]on de biotina-avidina. Se realiz]o un estudio físico en el que mediante introducci]on de un termocoupler en el interior de la muestra se determin]o la ve y la duraci]on de la fase de transici]on para muestras de 2 ml criopreservadas con dmso y dmso/hes en 3, 4 l de metanol y sin metanol a -80 grados c para obtener seis tipos de curvas. en segundo lugar se realiz]o un estudio biol]ogico en el que se determin]o si existían diferencias estadísticamente significativas en la recuperaci]on de células, células cd34+ y unidades formadoras de colonias cfu-gm, bfu-e y cfu-gemm, entre el método que utiliza hes/dmso y el método que utiliza dmso como criopreservante y ambos a su vez congelados con congelaci]on programada y con congelaci]on no programada. resultados la pureza obtenida con el método de selecci]on fue del 61%, recuperaci]on 89% y enriquecimiento 68 veces. Se demostr]o correlaci]on entre el porcentaje de cd34+ inicial y la pureza obtenida. en el estudio de los parametros de la curva de congelaci]on la muestra congelada con 10% dmso y 3 l de metanol, obtuvo los resultados más ]optimos con
Datos académicos de la tesis doctoral «Criopreservacion de celulas cd34+.«
- Título de la tesis: Criopreservacion de celulas cd34+.
- Autor: Martin Hernandez M. Paz
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 01/01/1998
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Fernando Hernández Navarro
- Tribunal
- Presidente del tribunal: Antonio Lopez Borrasca
- Juan José Vázquez Rodríguez (vocal)
- Luis Madero Lopez (vocal)
- Santiago Castillo Alvarez (vocal)