Tesis doctoral de Lorena Rodriguez Vierbucher
La proteína matriz (m) del virus respiratorio sincitial humano (vrsh) es una proteína estructural, interna, de membrana de 256 residuos. En este trabajo se demuestra que la proteína m tiene capacidad de unir rna, y se han determinado los residuos importantes para dicha interacción. Esta capacidad de la proteína m del vrsh se ha descrito para proteínas matrices de virus de las familias orthomyxovirus y filovirus, pero no en miembros de la familia paramyxovirus. Su unión a rna se ha demostrado en tres tipos de ensayos: retardo de la movilidad electroforética en gel de rnas marcados radiactivamente con p32, entrecruzamiento con luz uv y northern-western. No mostraba especificidad de secuencia ni requerimientos de longitud. Mostraba una cinética de tipo cooperativo saturable, con una kd aparente de 25 nm, y probablemente dos sitios de unión a rna. ensayos preparativos de entrecruzamiento con luz uv con sondas marcadas con p32, seguido de tratamientos químicos y enzimáticos, y determinación de secuencias n-terminales de péptidos marcados y no marcados, demostraron que los residuos de contacto estaban localizados entre los aminoácidos 120 y 170. Variantes de deleción y mutagénesis dirigida de residuos en esta región demostraron que los residuos de lisina (k) en posiciones 121, 130, 156 y 157, y el residuo de arginina (r) en posición 170, que estaban conservados en las proteínas m de diferentes miembros del género pneumovirus, eran esenciales para la unión a rna. La unión a rna de la proteína m (a través de los residuos 156, 157 y 170) no era esencial para su efecto inhibitorio de los procesos de transcripción y replicación viral in vivo. Tampoco era necesaria la unión a rna para formar oligómeros de alta masa molecular relativa, que probablemente forman estructuras anulares, que en otros sistemas virales se han relacionado con el metabolismo del rna. también se ha demostrado que la proteína m expresada transit
Datos académicos de la tesis doctoral «Mapeo de las regiones de union a rna de la proteina matriz (m) del virus respiratorio sincitial humano (vrsh). caracteristicas de la union.«
- Título de la tesis: Mapeo de las regiones de union a rna de la proteina matriz (m) del virus respiratorio sincitial humano (vrsh). caracteristicas de la union.
- Autor: Lorena Rodriguez Vierbucher
- Universidad: Autónoma de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 17/06/2005
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Nieves Villanueva Vico
- Tribunal
- Presidente del tribunal: esteban Domingo solans
- enrique Tabares (vocal)
- Rafael Muñoz fernandez (vocal)
- eugenia Gonzalez María (vocal)