Tesis doctoral de Mohamed Kamal Elsaid Abou-elella Amira
La citotoxidad por d-galactosamina (d-ga1n) es un modelo experimental adecuado de lesión hepatocelular aguda. Se ha demostrado que pge1 reduce la citotoxicidad inducida in vivo por d-ga1n mediante el aumento de la expresión de tnf-alfa y óxido nítrico sintasa inducible (inos) en hepatocitos. el presente estudio se diseñó para determinar el papel del tnf-alfa en la apoptosis y necrosis inducida por d-ga1n y su protección por pge1 en el cultivo primario de hepatocitos de rata en co-cultivo con células de kupffer. Los hepatocitos y las células de kupffer se aislaron de ratas macho mediante la perfusión con colagenasa y la purificación por centrifugación diferencial y elutriación, respectivamente. Los hepatocitos se co-cultivaron con las células de kupffer en una relación de 3,5:1 con la utilización de insertos de cultivo. para determinar el papel del tnf-alfa, se añadieron anticuerpos anti-tnf-alfa (0,3 mg/ml) 2h antes que la pge1 ó 4h antes que la d-ga1n. La apoptosis celular se evaluó con la aparición de fragmentación del dna, y la necrosis mediante la liberación de lactato deshidrogenasa (ldh) al medio de cultivo. la producción de óxido nítrico (on) se determinó por la cuantificación de los productos finales, nitrito+nitrato (nox), mediante el reactivo de griess. Tnf-a, il-1a, il-6, e ifn-g fueron cuantificados por elisa en el medio de cultivo. La lipoperoxidación se determinó mediante la valoración de malondialdehído (mda) en el medio de cultivo. Se observó que la inducción de apoptosis y necrosis por d-ga1n en los hepatocitos se asoció con un aumento de on, tnf-alfa y mda en el medio de cultivo. La protección por pge1 de la apoptosis por d-ga1n se asocia con una reducción de la concentración de on en el medio de cultivo. El co-cultivo de los hepatocitos con células de kupffer exacerba la necrosis y apoptosis inducida por d-ga1n. La muerte celular dependiente de células de kupffer no se relacionó
Datos académicos de la tesis doctoral «Papel de las células de kupffer en la muerte celular inducida por d-galactosamina y su protección con pge1 en el cultivo primario de los hepatocitos de rata«
- Título de la tesis: Papel de las células de kupffer en la muerte celular inducida por d-galactosamina y su protección con pge1 en el cultivo primario de los hepatocitos de rata
- Autor: Mohamed Kamal Elsaid Abou-elella Amira
- Universidad: Córdoba
- Fecha de lectura de la tesis: 18/03/2002
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Jordi Muntané Relat
- Tribunal
- Presidente del tribunal: José Antonio Barcena ruiz
- María teresa Mitjavila cors (vocal)
- Alcaín tejada Francisco Javier (vocal)
- joan Claria enrich (vocal)