Tesis doctoral de Pezzat Said Elias Bernardo
Construimos mediante ingeniería genética los diferentes vectores de expresión micobacteriano, a partir de los vectores parentales pmv261 y pmv361. Se desarrollaron 3 cepas bcg recombinantes expresando la proteína completa gp120 de la envuelta del vih, cepa (hxbc2). Se evaluaron diferentes promotores de bcg para inducir la expresión de la proteína heteróloga del vih. Inicialmente, usamos el promotor hsp60 de bcg, un promotor fuerte que ha demostrado ser uno de los más eficaces y posteriormente, se probó con un promotor débil denominado- antígeno. Una vez obtenidas las diferentes cepas bcg recombinantes se evaluó la expresión in vitro de la proteína mediante la técnica de western blot. posteriormente evaluamos in vivo la respuesta inmune celular específica, en un modelo animal murino. Se inmunizaron ratones con las cepas bcgr: 222viha, bcgr: 223viha y virus vaccinia modificado cepa ankara (vam), expresando el inmunogeno del viha correspondiente a la proteína entera gag y envuelta del subtipo a predominante en africa del este, más diferentes etpítopos ctl de nef, pol. La respuesta específica de células t cd8+, se detectó por la tinción de los tetrámeros y por la tinción intracelular de ifn-. finalmente para superar las limitantes en la diferenciación de la inducción de citocinas entre bcg (cepa salvaje) y bcgr por la técnica de elispot, evaluamos la expresión géncia de ifn-. A partir de linfocitos de ratón, delectando el arnm de esta citocina por la técnica de rt-pcr. aportaciones de la tesis: * diseño y desarrollo, por ingeniería genética y biología molecular de 3 cepas vacunales de bcg recombinantes. bcgr: 261 vih-1gp120 bcgr: 222 vih-1gp120 bcgr: 223 vih-1gp120 * estudio y descripción del reajuste genético que produce cepa salvaje, cuando esta es transformada por el vector de expresión micobacteriano pmv261 que incluye conado el fragmento de adn que codifica la proteína del vih-1 gp
Datos académicos de la tesis doctoral «Desarrollo de una vacuna preventiva contra el vih, basada en bcg recombinante«
- Título de la tesis: Desarrollo de una vacuna preventiva contra el vih, basada en bcg recombinante
- Autor: Pezzat Said Elias Bernardo
- Universidad: Barcelona
- Fecha de lectura de la tesis: 21/06/2005
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Joan Joseph Mune
- Tribunal
- Presidente del tribunal: tomas Pumarola suñe
- José Alcami pertejo (vocal)
- m. asunción Moreno camacho (vocal)
- francesc Vidal marsal (vocal)