Tesis doctoral de Raquel Criado García
Durante esta tesis doctoral se han obtenido anticuerpos policlonales de especificidad predeterminada frente a la enterocina l50 (entl50, sistema de dos péptidos [entl50a y entl50b]) y enterocina q (entq), los cuales han sido empleados junto con anticuerpos frente a la enterocina p (entp), obtenidos previamente, en diversos ensayos inmunoenzimáticos (elisa), lo que ha permitido la detección específica y la cuantificación de las enterocinas producidas por e. Faecium l50. Además, la combinación de ensayos inmunoenzimáticos y microbiológicos ha permitido determinar el efecto de la temperatura en la producción de estas bacteriocinas. A este respecto, la máxima producción de entl50 (entl50a y entl50b), entp y entq se detectó en cultivos desarrollados a 25, 37 y 47ºc, respectivamente. el trabajo de investigación desarrollado continuó con la caracterización genética de la producción de enterocinas por e. Faecium l50. Para ello, se procedió a la localización de los determinantes genéticos asociados a los fenotipos de producción e inmunidad de entl50, entq y entp mediante experiencias de hibridación adn-adn (southern-blot) y curación plasmídica, lo que demostró que se encuentran ligados genéticamente y se localizan en los plásmidos pciz1 (aprox. 50 kb) y pciz2 (aprox. 7,4 kb) y en el cromosoma, respectivamente. A continuación, se inició la caracterización molecular de pciz1 y pciz2 mediante la determinación de su secuencia nucleotídica parcial y total, respectivamente. El análisis informático de las secuencias nucleotídicas obtenidas permitió identificar los hipotéticos genes presentes en estos plásmidos, entre los que se incluyen los que constituyen los operones y/o agrupaciones génicas implicados en la producción, inmunidad y/o secreción de entl50, entq y entp. En lo que respecta al plásmido pciz1, éste incluye 27 hipotéticos genes agrupados en cuatro regiones implicadas presumiblemente en la: (i) producción de entp (orf1-3)
Datos académicos de la tesis doctoral «Caracterización inmunoquímica y genética de la producción de las enterocinas l50,p y q por enterococcus faecium l50. secuencia nucleotídica y análisis funcional de los plásmidos pciz1 y pciz2«
- Título de la tesis: Caracterización inmunoquímica y genética de la producción de las enterocinas l50,p y q por enterococcus faecium l50. secuencia nucleotídica y análisis funcional de los plásmidos pciz1 y pciz2
- Autor: Raquel Criado García
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 15/12/2006
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Luis Miguel Cintas Izarra
- Tribunal
- Presidente del tribunal: María Del Rosario Martín De Santos
- Victoria Francia Mª (vocal)
- Rosa María Del Campo Moreno (vocal)
- F. Nes Ingolf (vocal)