Tesis doctoral de María Ramirez Boo
El circovirus porcino tipo 2 ha sido identificado como el agente causal de llamado síndrome del destete porcino (pmws), que afecta a lechones y causa importantes pérdidas económicas en todo el mundo. Se sabe que el sistema inmune del cerdo esta implicado en la enfermedad y que los cerdos afectados sufren una profunda alteración en su inmunorespuesta. No obstante, hasta la fecha poco se sabe del mecanismo subyacente a la patogénesis de pmws y de la interacción del virus con el sistema inmune del hospedador. En este trabajo, presentamos un estudio genómico y proteómico en nódulos linfáticos de lechones previamente inoculados con pcv2, con el objetivo de aportar información sobre la patogénesis de la enfermedad de una forma global y determinar que rutas pueden estar afectadas después de la infección. con respecto a la tecnología de microarrays, se utilizó el chip porcino de affimetrix (genechip® porcine genome array). Después del análisis estadístico, 71 genes fueron encontrados sobrexpresados y 86 subregulados. Estos resultados fueron validados por qrt-pcr y el análisis de estos genes con herramientas bioinformáticas (array unlock y ingenuity pathway análisis) reveló la alteración de distintas funciones y rutas tras la infección. Entre las más destacadas se encuentran ciclo celular, transporte molecular y metabolismo lipídico. En lo que respecta a la respuesta inmune al pcv2, la señalización mediada por quimioquinas, tlrs o por el factor de activación de la células b resultaron afectadas así como diferentes proteínas (nf¿b, ifn¿, il12 and p38 mapk) con un importante papel reconocido en la modulación de la respuesta inmune. con respecto a la aproximación proteómica, se utilizaron dos estratégias: 2-de y electroforesis monodimensional seguida de digestión en gel, marcaje isotópico de péptidos con 16o/18o e identificación y cuantificación de péptidos por trampa iónica lineal. El uso combinado de ambas estrategias ha permitido identificar proteínas de membrana, proteínas de tamaño o punto isoeléctrico extremo así como isoformas o modificaciones postraducionales. Los resultados obtenidos por las dos aproximaciones fueron concordantes y complementarios, siendo el marcaje isotópico una alternativa mas robusta para llevar a cabo estudios de cuantificación. En total, 1493 proteínas fueron identificadas, 794 cuantificadas y se encontraron más de 100 diferencialmente reguladas. El análisis de estas proteínas con las herramientas bioinformáticas citadas revelo que son tres las rutas canónicas más alteradas, respuesta en fase aguda, estrés oxidativo mediado por nrf-2 y endocitosis caveolar, indicando su posible implicación en la respuesta del cerdo a la infección por el circovirus. Además, la tetraspanina cd81 resultó estar sobrexpresada, sugiriendo su posible papel en la internalización del virus. Por tanto, se ha comprobado que el uso combinado de técnicas de microarrays y proteómica junto con el uso de herramientas bioinformáticas abre un nuevo e importante camino para conseguir un conocimiento más exhaustivo y sistemático de las interacciones virus-patógeno.
Datos académicos de la tesis doctoral «Genomica y proteomica de la infeccion por circovirus porcino tipo 2 (pcv2)«
- Título de la tesis: Genomica y proteomica de la infeccion por circovirus porcino tipo 2 (pcv2)
- Autor: María Ramirez Boo
- Universidad: Córdoba
- Fecha de lectura de la tesis: 11/12/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Angela Moreno Lopez
- Tribunal
- Presidente del tribunal: diego Llanes ruiz
- Manuel gonzalo Claros diaz (vocal)
- angel Luis Lopez carrascosa (vocal)
- Jesús Vazquez cobos (vocal)