Tesis doctoral de Giovanni Pensabene Bellavia
La hibridación somática, o fusión de protoplastos, es una herramienta biotecnológica aplicable a la mejora de los cítricos. La utilización de esta técnica permite abordar objetivos que sería imposible plantear mediante la hibridación sexual u otras técnicas de mejora, tanto a nivel de mejora de variedades y patrones ya existentes, como para la obtención de nuevos genotipos de interés. El objetivo principal de esta tesis ha sido la aplicación de la hibridación somática a necesidades específicas de la citricultura española. Además se han realizado estudios sobre aspectos técnicos relacionados con la hibridación somática, con el objetivo de facilitar el trabajo de mejora que se realiza aplicando esta técnica. La tesis ha sido dividida en cuatro capítulos y dos apéndices que se describen a continuación. el primer capitulo está dirigido hacia la obtención de nuevos patrones de interés utilizando genotipos con características complementarias. Para ello se escogieron los genotipos citrange carrizo y citrus macrophylla que son dos de los patrones más utilizados en el cultivo de los agrios. Se compararon directamente la eficacia de los tres métodos de fusión de protoplastos disponibles para cítricos, aplicándolos paralelamente a un mismo cruzamiento. en el segundo capítulo se muestra la caracterización genética exhaustiva de las plantas obtenidas, tanto a nivel nuclear como a nivel citoplasmático. Los resultados de esta caracterización mostraron que los híbridos somáticos no siempre son la suma perfecta de los dos parentales y que puede haber cambios a nivel cromosómico, subcromosómico o citoplasmático. el tercer capítulo muestra el estudio llevado a cabo del efecto de la radiación con luz uv sobre la integridad del genoma de los protoplastos de cítricos. El interés en la aplicación de este tipo de radiación reside en la posibilidad de obtener híbridos somáticos asimétricos. Se ha estudiado el efecto de la exposición a dosis diferentes de luz uv sobre la viabilidad de protoplastos y el grado de fragmentación del adn utilizando diferentes técnicas como la citometría de flujo y la electroforesis en geles de agarosa. en el capítulo cuarto se describe la puesta a punto de un protocolo de aislamiento de protoplastos específico para clementinas. Se estudiaron y optimizaron algunas de las variables que afectan al rendimiento en protoplastos aislados, especialmente el estado fisiológico del material vegetal utilizado y las condiciones de aislamiento. el nuevo protocolo de aislamiento puesto a punto a permitido obtener nuevos híbridos somáticos y cíbridos que contienen el genoma de la variedad clemenules. los marcadores microsatélites son una herramienta muy valiosa en la mejora de cítricos porque permiten la identificación varietal, la caracterización de híbridos (sexuales y somáticos), la elaboración de mapas genéticos y la discriminación entre individuos zigóticos y nucelares. El apéndice 2 muestra los resultados del estudio de aplicación de la técnica sscp (single strand conformation polymorphism) a marcadores ssr. La técnica ssr-sscp ha permitido detectar polimorfismos en marcadores microstélite tradicionalmente considerados monomórficos.
Datos académicos de la tesis doctoral «Aplicación de la hibridación somática a la mejora de la citricultura española«
- Título de la tesis: Aplicación de la hibridación somática a la mejora de la citricultura española
- Autor: Giovanni Pensabene Bellavia
- Universidad: Politécnica de Valencia
- Fecha de lectura de la tesis: 21/09/2009
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Oscar Jesús Olivares Fuster
- Tribunal
- Presidente del tribunal: manuel Agusti fonfria
- nicasio Tusa (vocal)
- leandro Peña garcia (vocal)
- nuria Duran vila (vocal)