Tesis doctoral de María Pilar Gil Sánchez
El pénfigo vulgar (pv) es una enfermedad ampollosa cutánea autoinmune caracterizada por una separación suprabasal de los queratinocitos (acantólisis) y por la presencia de autoanticuerpos dirigidos frente a antígenos entre los q destacan la desmogleína 3 y/o 1, proteínas constitutivas de los desmosomas. Los autoanticuerpos pueden inducir acantólisis bien por efecto directo sobre su diana o por activar vías de señalización intracelulares. La activación de caspasas junto con cambios descritos en el citoesqueleto de los queratinocitos son otros mecanismos implicados. nuestro grupo de trabajo ha demostrado el papel de la activación de moléculas de señalización como las isoformas her, src y mtor, así como de algunas caspasas. el trabajo se centra en el papel de la fak (quinasa de adhesiones focales) en el desarrollo de las lesiones de pv. La fak, tirosina quinasa soluble y sustrato para la src, se activa vía her e integrinas. Desencadena señales intracelulares q regulan funciones celulares como el remodelamiento del citoesqueleto y el desmontaje y formación de estructuras de adhesión focal. Se sabe que antes de que las lesiones de pv se formen y se rompan los desmosomas, ocurre una reorganización de filamentos y una contracción del citoesqueleto en las células basales de la epidermis. Se ha demostrado que en el pv hay una sobreexpresión de la fak en las células acantolíticas. Además se ha publicado que la fak está implicada en la reorganización del citoesqueleto a través de procesos regulados por mtor, quinasa fundamental para que la acantólisis en el pv se produzca. el principal objetivo era estudiar si la fak fosforilada (p-fak) en y397/ 925, como índice de activación, tenía un papel en el pv. Además queríamos conocer la relación que podía haber entre la fak y moléculas de señalización implicadas en el pv como son las isoformas her, src, mtor y caspasas. Finalmente nos planteamos estudiar la relación entre el índice bax/ bcl-2 y actividad de caspasas -3 y -9 con moléculas de señalización como her, src y mtor, además de fak. para cumplir estos objetivos empleamos un modelo murino (c57bl/6j recién nacidos) mediante la inyección intradérmica de fracciones de igg procedentes de tres enfermos de pv cutáneo-mucoso y de un control sano. Los inhibidores utilizados se inyectaron de la misma manera, 2 h. Antes de la administración de las fracciones. éstos fueron: cl-387,785 (inhibidor de isoformas her), pp1 (inhibidor de src), rapamicina (inhibidor de mtor), cpm-vad-cho (inhibidor pan-caspasas) y pf-573,228 (inhibidor de fak). las preparaciones de inmunohistoquímica se analizarán utilizando el programa informático de análisis de imágenes matlab y los algoritmos de segmentación fueron diseñados por el dr. Ortiz de solórzano (cima, universidad de navarra). de esta manera pudimos comprobar cómo la administración de igg-pv a nuestro modelo murino producía un aumento de la p-fak (y397/ 925) en la capa basal de la epidermis y el pretratamiento con inhibidor de fak impedía la acantólisis, demostrando así que la activación de fak es necesaria en el desarrollo de pv. además observamos como la p-fak regulaba la actividad de src y mtor al comprobar una disminución de p-src y p-mtor cuando pretratamos a los ratones con inhibidor de fak. resultó interesante comprobar que la expresión de p-fak (y397/ 925) disminuía al pretratar a los ratones con inhibidor de her, src, mtor y caspasas, indicando que la activación de estas moléculas regulaba la p-fak. También pudimos observar como fak, mtor, src y her contribuían a la acantólisis en el pv afectando el índice bax/bcl-2 y la activación de caspasas al demostrar una normalización de estos parámetros tras pretratar a los ratones con inhibidores de esas quinasas. en conclusión, nuestros hallazgos sugieren una participación de la fak fosforilada (y397/925) en el desarrollo de pv, la cual modularía la actividad de src, mtor y caspasas, pudiendo estar activada a su vez por las her, src, mtor y caspasas.
Datos académicos de la tesis doctoral «Papel de la fak en la acantólisis del pénfigo vulgar en un modelo murino«
- Título de la tesis: Papel de la fak en la acantólisis del pénfigo vulgar en un modelo murino
- Autor: María Pilar Gil Sánchez
- Universidad: Navarra
- Fecha de lectura de la tesis: 20/04/2012
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Agustin España Alonso
- Tribunal
- Presidente del tribunal: ignacio Querol nasarre
- Carlos gabriel de Miguel vazquez (vocal)
- ricardo Suarez fernández (vocal)
- José Manuel Mascaró galy (vocal)