Tesis doctoral de Monica Muñoz Ubeda
La tesis titulada ¿lipofección del dna con nanovectores coloidales de interés en terapia génica¿ supone un gran avance en cuanto a la caracterización biofísica y bioquímica de nanovectores coloidales del dna. El objetivo de esta tesis es aportar info rmación fisicoquímica y bioquímica que permita ayudar a comprender y discernir el comportamiento de los lipoplejos a ph fisiológico, sus características y propiedades, así como su eficiencia en la transfección del dna y su viabilidad/citotoxicidad ce lular, cara a su potencial aplicación en terapia génica. En esta tesis se han estudiado seis liposomas catiónicos mixtos diferentes constituidos por un fosfolípido zwitteriónico, dope, y un lípido catiónico (cl) (doepc, dc-chol, o c16(ch3)2amonio)2cn , siendo n = 2, 3, 5 o 12), que junto con un dna lineal (ctdna) o un plásmido dna (pegfp-c3 ó pdna), interaccionan electrostática y superficialmente formando los lipoplejos. La elección del lípido catiónico ha permitido estudiar el efecto que tiene s obre las propiedades fisicoquímicas, estructurales y bioquímicas, el tipo de grupo polar, de región apolar, si presentan una o dos cabezas polares, y la longitud de la cadena alquílica espaciadora que une las dos cabezas amonio de los cl gemini. Se h a estudiado el efecto que produce el dope en las propiedades del lipoplejo y en la eficiencia de transfección, realizándose un amplio estudio en función de la fracción molar de cl en el liposoma mixto, ?, Y de relaciones de carga efectiva, ?Eff, entr e el liposoma catiónico y el dna. Se han desarrollado nuevos protocolos de preparación de los liposomas y lipoplejos, y nuevas metodologías de trabajo por medio de varias técnicas biofísicas (experimentales y teóricas) y bioquímicas para la determina ción de la eficiencia en la transfección del pdna y la viabilidad celular de los lipoplejos objeto de estudio. Se ha justificado experimentalmente, por primera vez, por qué se requiere menos lípido catiónico para transfectar el plásmido dna que para transfectar el dna lineal. Se ha determinado el valor (l/d)? De electroneutralidad, el tipo de interacción entre cl-dna, las cargas efectivas de cl y de pdna accesibles, la fluidez de la bicapa lipídica, la estructura, el tamaño y la morfología de lo s cl y lipoplejos, el grado de compactación y transporte del dna, la eficiencia en la transfección y su viabilidad celular. Con el modelo teórico se ha obtenido el diagrama de fase de los lipoplejos, analizándose los procesos de agregación-desagregac
Datos académicos de la tesis doctoral «Lipofección del dna con nanovectores coloidales de interés en terapia génica.«
- Título de la tesis: Lipofección del dna con nanovectores coloidales de interés en terapia génica.
- Autor: Monica Muñoz Ubeda
- Universidad: Complutense de Madrid
- Fecha de lectura de la tesis: 28/02/2013
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Emilio Aicart Sospedra
- Tribunal
- Presidente del tribunal: María belén Yélamos lópez
- Alberto Rodriguez pulido (vocal)
- ulf Olsson (vocal)
- Luis García río (vocal)