Tesis doctoral de Eugenia álvarez álvarez
El objetivo del presente trabajo fue estudiar el posible efecto de la adición de factores de crecimiento a los medios utilizados en la producción in vitro de embriones de ganado bovino. Para ello se recogieron, mediante aspiración, ccos a partir de ovarios de hembras sacrificadas en matadero. Los factores de crecimiento egf, fgfb, igf-i, pdgf, y la mezcla de todos ellos, efip, fueron añadidos al medio de maduración, al de cultivo (en día 1 o 3 postinseminación), o bien a ambos, comparándolos con la adición de fcs o con un medio carente de fuente proteica (control). en todos los casos, los resultados obtenidos tras la adición de fcs fueron los mejores al proporcionar los mayores porcentajes de blastocistos eclosionados, no pudiendo ser sustituido por ninguno de los factores de crecimiento. Por otra parte, la utilización de fcs resultó ser más beneficiosa cuando se hizo a partir del día 3 postinseminación. se demostró que el cultivo en grupos pequeños fue muy desfavorable para la producción in vitro de embriones bovinos y que el desarrollo embrionario temprano mejoraba cuando se maduraba y/o cultivaba en microgota (25 microlitrosl de medio) frente al cultivo en pocillo (500 microlitros de medio). Ninguno de los complementos proteicos mantuvo el desarrollo embrionario hasta el estadio de blastocisto eclosionado, obteniéndose los mejores resultados con la adición de fcs y con los factores de crecimiento igf-i y egf. Mientras que el fcs permitió el crecimiento embrionario hasta el estadio de blastocisto expandido, con el factor de crecimiento egf solo se logró hasta el de blastocisto y con el igf-i, únicamente se mantuvo su desarrollo hasta el estadio de mórula o blastocisto joven. en este trabajo también se valoró la calidad de los blastocistos expandidos obtenidos a partir de ccos madurados con fcs y cultivados con diferentes fuentes proteicas a partir del día 1 o del día 3 postinseminación. Para ello se analizó por microscopia confocal el número de células y los índices de mitosis, apoptosis, apoptosis temprana y necrosis, en la mci, en el te y en el blastocisto total. El grupo cultivado con fcs proporcionó embriones con los mejores índices de calidad. cuando se añadió la fuente proteica a partir del día 1 postinseminación, fue el factor de crecimiento egf, el que dio lugar a los embriones con mayor número de células y el índice de necrosis más bajo. Con la adición combinada de los cuatro factores de crecimiento (grupo efip), los embriones presentaron un alto índice de mitosis y un bajo porcentaje de apoptosis. la utilización de una fuente proteica en el medio de cultivo a partir del día 3 postinseminación, resultó más adecuada para la combinación de factores (grupo efip), para el fcs (aunque el índice de necrosis fuera elevado) y para el fgfb (aunque disminuyera el número de células en el blastocisto total). la calidad del blastocisto podría predecir su capacidad para implantarse y su crecimiento futuro, pero también podría indicar la existencia de un nivel crítico para estos índices de calidad, por debajo (número de células, mitosis), o por encima (apoptosis, apoptosis temprana, necrosis) de los cuales la vida del embrión estaría comprometida. Teniendo en cuenta los resultados de desarrollo y de calidad embrionaria, obtenidos en este trabajo, nos resulta difícil establecer esta relación, por lo que serán necesarios nuevos estudios, quizás en estadios más tempranos del desarrollo embrionario, para averiguar el umbral en que estos procesos son perjudiciales para los blastocistos producidos in vitro y poder extrapolarlos a los obtenidos in vivo.
Datos académicos de la tesis doctoral «Estudio de la influencia de los factores de crecimiento en la producción in vitro de embriones bovinos«
- Título de la tesis: Estudio de la influencia de los factores de crecimiento en la producción in vitro de embriones bovinos
- Autor: Eugenia álvarez álvarez
- Universidad: León
- Fecha de lectura de la tesis: 05/02/2010
Dirección y tribunal
- Director de la tesis
- Maite Carbajo Rueda
- Tribunal
- Presidente del tribunal: pedro jose Garcia herradon
- teresa Mogas amoros (vocal)
- Carlos hidalgo Olegario ordóñez (vocal)
- Mª francisca González sevilla (vocal)